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  • 發布時間:2020-09-29 11:19 原文鏈接: 從全血采樣、保存、運輸到RNA純化

    血液采集
        PAXgene系統提供標準化的BD Vacutainer(真空采血管,室溫保存),配合使用一次性消毒采血針作靜脈穿刺,采血管內的負壓會迫使血液自動吸入管中,當搜集的血液達到2.5毫升刻度線時停止采血。采血管中本身已經預裝了6.9毫升的RNA穩定試劑,拔出針頭后只要將采血管輕輕顛倒8—10次將二者混勻即可。

    樣品保存和運輸
        有許多實驗需要從血液中提取RNA,這其中zui大的難題是RNA非常不穩定:研究表明在采血后的短短幾個小時內RNA即迅速且顯著降解,另外部分RNA在采血后受到誘導,表達增加。這種RNA降解和基因的體外誘導表達會導致在分析體內基因轉錄本豐度時出錯,甚至低豐度的信息丟失。

        PAXgene系統中的采血管內預裝的RNA穩定劑能夠阻斷RNA的降解以及防止體外誘導產生新的RNA轉錄本。混合后的血液樣本可以在室溫下穩定5天,在4度條件下穩定至少90天,方便樣品的保存和運輸。對于需要在不同時間或地點采樣,背著液氮罐到處跑的研究人員來說,這是個好消息——不必擔心降解而忙著作實驗,可以等搜集一批樣品再統一處理,提高工作效率,節約時間和精力。此前曾經介紹過的RNeasy Protect Kit 只適用于組織和培養細胞,不適用于全血,RNeasy Protect Bacteria Kit 只適用于細菌,現在這個PAXgene系統則是徹底解決全血的RNA保存和純化的問題。

    RNA純化
        將保存的樣品離心,前面提到的RNA穩定試劑包含裂解液,得到的核酸沉淀經過洗滌后重懸,加入含有蛋白酶K的裂解液進行徹底消化,離心除去剩余的雜質,上清加入乙醇后轉入QIAGEN公司特別設計的RNA純化柱,離心后RNA被吸附在特制的硅膠膜上,經洗滌出去雜質后即可用洗脫液將RNA洗脫,得到高純度的RNA。可以用于包括定量RT—PCR、普通RT—PCR、NASBA、表達芯片分析、cDNA合成、核酶保護性分析、Northern Blot、mRNA篩選以及引物延伸等多種用途。


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