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  • 發布時間:2021-03-01 23:46 原文鏈接: 銅檢測試劑盒(Cuprizone比色法)說明書

    中文名稱:銅檢測試劑盒(Cuprizone比色法)
    產品規格:50T
    發貨周期:1~3天
    用途:
    以雙環己酮草酰二腙法(又稱Cuprizone法)定量檢測血清、血漿銅含量
    銅檢測試劑盒(Cuprizone比色法)操作規程
    1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
    2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
    3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
    4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
    5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
    6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
    7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
    8、結果分析
     a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
     b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
    銅檢測試劑盒(Cuprizone比色法)注意事項:
    1、懸浮細胞用此法時必須經離心后才能吸出上清再加DMSO。
    2、Formazan 的生成不僅與活細胞數成比例,也受作用時間的影響,因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
    3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時,請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
    4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
    注意事項:
    以雙環己酮草酰二腙為底物,檢測620nm處測吸光度
    儲存條件:4℃,避光,12個月

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