對GMP車間潔凈區定期進行滅菌是保證生產產品質量的一個重要環節。目前在我國對空間進行滅菌的常用方法是比較傳統的甲醛熏蒸法。甲醛的殺菌能力不容置疑，但是隨著科學技術的發展以及人們環保意識的增強，其越來越受到專家的質疑，因為甲醛是一種三致危害物。為了解決甲醛滅菌時間過長以及毒性和殘留問題（會產生結晶狀殘留物），國內有不少企業開始采用汽化過氧化氫滅菌技術。過氧化氫是一種廣譜殺菌劑，汽化過氧化氫滅菌技術由于滅菌時間短、無毒、無殘留，且滅菌效果容易驗證，廣泛被歐盟國家認可。我國的GMP認證要與歐盟接軌，潔凈區采用過氧化氫滅菌技術必然為大勢所趨。
目前汽化過氧化氫滅菌已成為各國藥典、藥品生產質量管理規范(GMP)、消毒滅菌技術規范所推薦的方法，滅菌工藝已經非常成熟，重復性好，有專門的化學指示劑和生物指示劑驗證過氧化氫氣體分布均勻情況和無菌保證水平。可廣泛應用于生物制藥、醫療衛生、生物實驗室和動物研究實驗室等諸多領域。
一、試劑與儀器：
（1）生物指示劑（BiologicalIndicator，BI）：106CFU/片的嗜熱脂肪芽孢桿菌，ATCC12980；
（2）化學指示劑（ChemicalIndicator，CI）；
（3）濃度為35%的食品級過氧化氫溶液；
（4）胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB）；
（5）PEA MLT-17zeta汽化過氧化氫發生器；
（6）PEA LiRo氣體分布系統；
（7）滅菌車間：某疫苗生產單位GMP潔凈車間，潔凈區層高2.8m、面積100㎡，空間總體積約280m3。
圖1、某疫苗生產單位GMP潔凈車間
二、滅菌過程：
整個滅菌過程分為以下幾個階段：
（1）將PEA MLT-17 zeta發生器和LiRo氣體分布系統推入潔凈區前，先將設備表面用75％酒精擦拭清除干凈，根據滅菌空間體積大小，向儲液桶內添加足量的過氧化氫溶液；
（2）通過潔凈車間的空調系統對潔凈區的溫度和濕度進行調控，使二者達到設備可以滅菌運行的區間范圍；
（3）在潔凈車間內布置足量的生物指示劑和化學指示劑，并做好標記；
（4）在設備端設置滅菌程序，一個完整的滅菌循環主要包含以下4個部分：調試階段（Waiting，Conditioning，Heating），主要是為人員撤離以及設備預熱階段；快速注入階段（Vapourizing1），在此階段過氧化氫氣體以一個較快的速率注入待滅菌空間，環境中過氧化氫氣體濃度迅速升高；慢速注入階段（Vapourizing2），在此階段過氧化氫氣體以一個較慢速率注入待滅菌空間，維持過氧化氫氣體濃度保持一定的時間；降解階段（Neutralisation，Afterrun，End），在此階段過氧化氫氣體迅速分解產生水分和氧氣，環境中過氧化氫氣體濃度迅速下降。
圖2、滅菌循環主要滅菌程序設置
（5）當溫、濕度達到指定范圍后，關閉空調系統，人員撤出滅菌潔凈車間，啟動滅菌循環，對車間進行門密封；
（6）滅菌循環結束，開啟空調通風系統通過潔凈空氣置換以排除房間內部殘留的過氧化氫，從而使房間內空氣中過氧化氫氣體濃度低于職業允許暴露水平1ppm；
（7）收取化學指示劑和生物指示劑，觀察統計化學指示劑的變色情況，無菌操作取出生物指示劑將其接種到TSB培養基中，所有培養基均需在培養箱中55℃～60℃的條件下進行培養，觀察培養24h后和第7天的結果，同時做好陽性對照和空白對照；
（8）經過24 h的培養，若培養液變渾濁，則判定為陽性；若培養液澄清，則為陰性；繼續培養至第七天，如果培養液變渾濁，則判定為滅菌不合格；如果培養液澄清，則判定為滅菌合格。
三、滅菌結果：
汽化過氧化氫滅菌技術，可對空氣與物體表面進行生物除染，是一種非常有效的消毒滅菌方法。PEA的汽化過氧化氫滅菌技術整個過程采用全自動化智能控制，可精確控制過氧化氫氣體濃度，材料兼容性好，可減少對工作人員與環境的危害，其滅菌過程、工藝具有重現性，綠色、環保、安全可靠。
圖3、PEA發生器和氣體分布系統在車間內的擺放位置及BI和CI的布點位置
滅菌循環結束，所有的化學指示劑均變色明顯，表明過氧化氫氣體在空間內分布均勻；所有的生物指示劑無論是在培養的第24h或者培養結束的第7天，培養基均未變渾濁，表明滅菌合格。
汽化過氧化氫滅菌技術是目前用于可密閉空間（如GMP車間、醫院病房、實驗動物中心、小型倉庫等）和各種人造設備（如隔離器、冷凍干燥機、孵化箱、傳遞窗、生物安全柜、壓力蒸汽滅菌器、過濾器和各類風管及管道等）的一種可靠的消毒滅菌方法，具有廣闊的發展前景，是取代甲醛和臭氧等傳統空間消毒滅菌的理想方法，也是今后空間消毒滅菌的發展趨勢。