熒光酶標儀與光吸收酶標儀原理及區別

熒光酶標儀原理

由光源氙弧燈發出的光通過切光器使其變成斷續之光以及激發光單色器變成單色光后，此光即為熒光物質的激發光，被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光，經過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上，由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀，激發光單色器和熒光單色器的光柵均由電動機帶動的凸輪所控制，當測繪熒光發射光譜時，將激發光單色器的光柵，固定在zui適當的激發光波長處，而讓熒光單色器凸輪轉動，將各波長的熒光強度訊號輸出至記錄儀上，所記錄的光譜即發射光譜。

當測繪熒光激發光譜時，將熒光單色器的光柵固定在zui適當的熒光波長處，只讓激發光單色口的凸輪轉動，將各波長的激發光的強度訊號輸出至記錄儀，所記錄的光譜即激發。

當進行樣品溶液的定量分析時，將激發光單色器固定在所選擇的激發光波長處，將熒光單色器調節至所選擇的熒光波長處，由記錄儀得出的信號是樣品溶液的熒光強度。

光吸收酶標儀原理

光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。光吸收酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物吸光值。jjymafwh

光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。

檢測單位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，OD=1og（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系：E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。

OD值由下述公式計算：

E=OD=C×D×E

C為檢測物的濃度

D為檢測物的厚度

E為摩爾因子

在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長，在此波長下，此物質能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。

但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收zui小。酶標儀檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。