葡萄球菌屬細菌的微生物學檢驗:一、生物學特性葡萄球菌是革蘭陽性球菌，大小0．5～1．5μm ，呈單、雙、四聯、短鏈狀或無規則葡萄狀排列。無動力、無芽胞。其代謝方式是呼吸兼發酵。觸酶陽性。通常氧化酶陰性，還原硝酸鹽，能被溶葡萄球菌素溶菌，但不被溶菌酶溶菌。能利用多種碳水化合物，產酸。產生胞外酶，如葡萄球菌血漿凝固酶。多數菌為兼性厭氧菌，有氧條件下生長好，最適生長溫度35 ℃～40 ℃，最適p H7．0～7．5 。金黃色葡萄
一、生物學特性
葡萄球菌是革蘭陽性球菌，大小0．5～1．5μm ，呈單、雙、四聯、短鏈狀或無規則葡萄狀排列。無動力、無芽胞。其代謝方式是呼吸兼發酵。觸酶陽性。通常氧化酶陰性，還原硝酸鹽，能被溶葡萄球菌素溶菌，但不被溶菌酶溶菌。能利用多種碳水化合物，產酸。產生胞外酶，如葡萄球菌血漿凝固酶。多數菌為兼性厭氧菌，有氧條件下生長好，最適生長溫度35 ℃～40 ℃，最適p H7．0～7．5 。金黃色葡萄球菌某些少見菌株，亦需要CO2 或血紅素、維生素K等物質。葡萄球菌細胞壁缺陷型菌株適宜在高滲環境中生長。DNA 中G＋C含量：30～39 mol％。模式菌：金黃色葡萄球菌。
二、微生物學檢驗
1．檢驗程序
2．標本采集
由于該屬細菌對干燥和溫度抵抗力強，且易從感染部位獲取標本，故按常規方法采取標本。然而該屬細菌廣泛分布在人體皮膚和粘膜， 采取時避免病灶周圍正常菌群污染。
3．標本直接檢查
無菌體液如腦脊液和關節穿刺液可使用涂片、革蘭染色、直接顯微鏡檢查，查見細菌具有重要臨床價值，其他體液標本如同時伴有炎性細胞時則直接顯微鏡檢查結果也具有參考價值。涂片檢查發現有革蘭陽性球菌，則可向臨床發生初步報告“查見類似葡萄球菌屬革蘭陽性球菌”，并進一步用培養法和合適的鑒定技術予以證實。
4．分離培養與藥學招聘鑒定
臨床標本可接種于血瓊脂平板，那些有污染的標本如糞便等應接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板，血液標本則用肉湯增菌培養基。孵育過夜平板上可見直徑約為2～3 mm，呈金黃色、白色或檸檬色的光滑、不透明、凸起圓形菌落，有時可見β溶血環。挑取菌落作鑒定試驗，在鑒定結果報告以前， 平板應繼續室溫放置2 ～3 天，觀察菌落性狀，有助于菌種鑒定。
細菌鑒定方法如下：
（1)菌落性狀。血瓊脂平板孵育24h 后，菌落直徑1～3 mm ，培養物繼續置室溫生長，2 ～3 天后不同種葡萄球菌菌落性狀如下所述：
a．金黃色葡萄球菌：較大，直徑為6～8 mm，光滑、完整、稍隆起，半透明，金黃色色素或橙色。
b．表皮葡萄球菌：較小，直徑為5～6 mm ， 某些產粘液菌株能粘附在瓊脂平板表面，無色素或白色色素。
c．溶血葡萄球菌：5～9 mm，光滑奶酪狀，不透明，無色素或奶油色、黃色。
d．里昂葡萄球菌：4～7 mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色色素和沃氏葡萄球菌相似。
e．腐生葡萄球菌：5～8 mm 邊緣整齊，光滑，不透明，凸起，白色或擰檬樣色素。疑為葡萄球菌屬細菌菌落以革蘭染色證實為陽性球菌，以與酵母菌區別。
（2)凝固酶試驗。是廣泛應用于鑒定引起急性感染的病原性葡萄球菌的一種試驗。有玻片法和試管法兩種。該試驗所使用的血漿為EDTA抗凝兔血漿。
a．玻片凝固酶試驗：金黃色葡萄球菌表面有結合的凝固酶（聚集因子)，與血漿中的纖維蛋白原交聯使菌體快速凝聚。試驗時挑取少數菌落培養物（不能用生長于高鹽瓊脂上的菌落) 加入一滴血漿，10秒內觀察細菌聚集和凝塊形成。金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現陽性反應。
b．試管凝固酶試驗：細菌分泌到菌體外的凝固酶被血漿中的協同因子（cofactor)激活形成復合物，再使纖維蛋白原轉變成纖維蛋白。試驗時，以孵育過夜的牛心腦浸液肉湯培養物和血漿在37 ℃水浴中孵育4h，觀察凝塊形成。如試驗結果為陰性者再置室溫18～24h ，因某些菌種（中間葡萄球菌、豬葡萄球菌) 的凝集出現所需時間長4h 。但必須注意：
① 某些菌株產生的葡激酶在延長孵育時間后可使凝塊溶解使之產生假陰性；
② 若使用不是無菌血漿可產生假陽性或假陰性結果；
③ 細菌不是純培養物或污染可導致假陽性。
c．其他凝固酶試驗：尚有商品化膠乳凝集試驗和間接血凝試驗檢測凝固酶。膠乳凝集試驗較一般的玻片法的特異性和敏感度高。
另外有一種新型的玻片試管法試驗， 先將凍干的兔血漿置人反應管中，
用前復溶，混人數個菌落，1 分數時懸液凝聚者為陽性，仍為懸液者為陰性。再將陰性反應管再經35 ℃溫育5 小時，觀察是否凝固以判斷是否存在游離凝固酶。
（3)耐熱核酸酶試驗。大多數金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產生耐熱核酸酶。將待測菌的過夜肉湯培養物置沸水浴15min 后， 滴加于含甲苯胺藍核酸瓊脂上已打好的直徑為2～5 mm 小孔內，置35 ℃ 孵育，1h 后觀察結果，環繞孔周圍藍色瓊脂轉變為粉紅為陽性。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。
（4)磷酸酶試驗。大多數的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌，該試驗陽性。將待測菌種點種在加有硝基酚磷酸鹽的p H5．6 ～6．8 M H 瓊脂上，孵育18 ～24h ，菌落周圍出現黃色為陽性。
（5)吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗。溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中間葡萄球菌為試驗陽性。將孵育24 小時斜面培養物接種在含吡咯烷酮－β萘基酰胺（PY R) 肉湯中，使細菌濃度為2 號麥氏管濁度，35 ℃ 孵育2小時，加入PYR試劑后2分鐘內呈現深紫紅色為陽性。
（6)其他鑒定試驗。鳥氨酸脫羧酶試驗、脲酶試驗、β－半乳糖苷酶、3－羥基丁酮酸試驗、新生霉素敏感試驗、多粘菌素B 耐藥試驗、糖產酸試驗是常用的葡萄球菌屬種間細菌的鑒定生化試驗。臨床上常見葡萄球菌菌種的鑒別見下表。商品化鑒定系統多應用糖發酵、傳統的鑒定試驗以及酶的產色底物試驗，常用的有API 、Staph－ID 系統、APIstaph 系統，ID32staph 系統、uiten 革蘭陽性鑒定卡、Microscan系統、Miniten 系統等。
