2、結 果
2.1 雙歧桿菌的血凝活性 3株青春型雙歧桿菌對6種紅細胞的血凝滴度見表1,3株細菌均能凝集6種紅細胞,菌株間及各種紅細胞間無顯著差異。
表1 雙歧桿菌血凝滴度
菌株 | 人O | 人B | 綿羊 | 兔 | 雞 | 小鼠 |
標準株 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶2 | 1∶4 | 1∶4 |
1027株 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶2 | 1∶4 | 1∶4 |
1124朱 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶4 | 1∶2 | 1∶4 | 1∶4 |
2.2 生長條件對雙歧桿菌血凝的影響 雙歧桿菌分別于硫乙醇酸鹽液體及雙歧桿菌選擇性固體培養基生長后,分別與人O型及人B型紅細胞進行血凝試驗,結果見表2,固體培養的雙歧桿菌的血凝滴度略低于液體生長者。液體生長的雙歧桿菌用原耗盡培養液上清懸浮后具有血凝活性,而用新鮮培養液或BPS懸浮則無血凝活性;單獨耗盡培養液上清也具有血凝活性。說明,耗盡培養液上清中含雙歧桿菌血凝素。
表2 液體及固體培養雙歧桿菌血凝滴度的比較
菌株 | 液體培養雙歧桿菌 | 耗盡
上清 | 固體培養
PBS懸浮 | ||
懸 浮 | 新鮮培養液 懸浮 | PBS懸浮 | |||
標準株 | 1∶4 | - | - | 1∶4 | 1∶2 |
1027株 | 1∶4 | - | - | 1∶4 | 1∶2 |
1124株 | 1∶4 | - | - | 1∶4 | 1∶2 |
2.3 雙歧桿菌血凝素的確定 為確定血凝素的性質,觀察了耗盡培養液上清經各種處理后對血凝的影響,結果見表3,血凝活性能被BSA及NaOH抑制;不受胰蛋白酶及溫度的影響。根據這一結果,對雙歧桿菌血凝素進行了初步提取,證實其血凝素為LTA。
表3 耗盡培養液上清經各種處理對血凝的影響
處理因素 | 耗盡培養液上清 | ||
標準株 | 1027株 | 1124株 | |
對照 | + | + | + |
胰蛋白酶(25mg/ml) | + | + | + |
胰蛋白酶(12.5mg/ml) | + | + | + |
BSA(50mg/ml) | - | - | - |
BSA(25mg/ml) | - | - | - |
BSA(12.5mg/ml) | - | - | - |
NaOH(0.1N) | - | - | - |
100℃ 10min | + | + | + |
注:*對照組及各處理因素均為37℃