流式細胞儀在檢驗醫學中的應用

流式細胞儀是一項集激光技術、電子物理技術、光電測量技術、計算機技術以及細胞熒光化學技術、單克隆抗體技術為一體的新型高科技儀器。概括來講，流式細胞術就是對于處在快速直線流動中的細胞或生物顆粒進行多參數的快速的定量分析和分選的技術。從開始設想到第一臺儀器的問世，科技工作者進行了不懈的努力。隨著各相關技術的迅速發展，流式細胞術已經成為日益完善的細胞分析和分選工具。目前，流式細胞儀已普遍應用于免疫學、血液學、腫瘤學、細胞生物學、細胞遺傳學、生物化學等臨床醫學和基礎醫學研究領域[2]。我科于2010年6月引進了一臺BD公司的FACSCalibur流式細胞儀，現已投入到臨床的應用中，為臨床診斷和科研提供了強有力的手段。
流式細胞分析(flowcytometryFCM),又稱流式細胞術。其原理是將待測細胞經特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱，后者與入射的激光束垂直相交，液柱中的細胞被激光激發產生熒光。儀器中一系列光學系統(透鏡、光闌、濾片、和檢測器等)收集熒光、光散射、光吸收、或細胞電阻抗等信號。計算機系統進行收集、儲存，顯示并分析被測定的各種信號，對各種指標作出統計分析
流式細胞術在腫瘤學上的應用
大量的臨床應用表明，流式細胞術對腫瘤細胞學的診斷正確率已達常規細胞學診斷水平。腫瘤細胞對化療藥物的耐受性是腫瘤治療的主要障礙。腫瘤細胞的耐藥性可分為原發耐藥和繼發耐藥，前者在化療前就存在于腫瘤細胞中，與用藥無關，后者是由化療藥物誘導產生的，即在藥物使用前對藥物敏感，而在用藥之后產生耐藥。

繼發耐藥根據耐藥譜的不同又可分為原藥耐藥(PDR)和多藥耐藥(MDR)。MDR 相關蛋白包括P 糖蛋白、多藥耐藥相關蛋白等。它們都屬于ATP 酶活性轉運蛋白，均是通過藥物外排泵的作用降低細胞中藥物的聚集。因此應用FCM 檢測腫瘤細胞的多藥耐藥相關蛋白的表達水平，對監測臨床腫瘤化療效果及藥物的選擇有一定意義。
流式細胞術在臨床細胞免疫中的應用
淋巴細胞亞群的測定 淋巴細胞分為T淋巴細胞(CD3)、B淋巴細胞(CD19)、NK淋巴細胞(CD16+56)三大群；T淋巴細胞又分為T輔助細胞/誘導細胞(CD4)、T抑制和細胞毒細胞(CD8)。
 臨床應用 總的T淋巴細胞和B淋巴細胞百分數可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病。了解CD4+和CD8+淋巴細胞的百分數有助于監測患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反應的患者的免疫狀態。

正常人淋巴細胞CD4+/CD8+比值大約為2/1，比值升高表明機體免疫機能亢進，見于自身免疫性疾病，如SLE、類風濕性關節炎、自身免疫性溶血等。比值降低表明機體免疫機能下降，如艾滋病、病毒感染、腫瘤患者、活動性肝硬化、AA等。
流式細胞術在血液病中的應用
流式細胞術對白血病的診斷與分型、治療方案選擇與預后判斷、發病機理研究等有重要價值[4]。白血病系列分化抗原T淋巴細胞白血病：CD3、CD5、CD7。B淋巴細胞白血病：CD10、CD19、CD22。NK淋巴細胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO(髓過氧化物酶)。紅白血病：GlyA(血型糖蛋白A)。巨核細胞白血病：CD41、CD42、CD61。

臨床應用:①用流式檢測白血病和淋巴瘤：對于形態學、細胞化學染色不能肯定的病例。白血病的流式分析是形態學的補充和深化;②形態學為急性淋巴細胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)，但缺乏特異性淋巴細胞系列抗原標記者;③混合性白血病;④部分髓系白血病，目前免疫分型對粒細胞和單核細胞白血病的鑒別尚有一定困難;⑤慢性淋巴細胞白血病(CLL);⑥微小殘留白血病。

流式細胞術在網織紅細胞方面的應用
 
網織紅細胞生成指數(RMI)是骨髓移植后的早期監測指標，是評價貧血藥物療效的一個重要和敏感的指標。網織紅細胞生成指數不但是一個監測腎移植后紅細胞生成活性的準確指標，而且比網織紅細胞計數更敏感。
流式細胞術在血栓或出血性疾病中的應用
血小板功能的檢測

血小板活化程度可由血小板膜糖蛋白(GP)表達水平的高低來判斷。FCM測定GP的表達情況以成為檢測血小板功能的一種新方法。血小板活化時其質膜糖蛋白較其靜止期發生很大變化。FCM用于分析血小板或血小板亞群GP，此外，FCM還可通過單抗免疫標記(GPⅡb/Ⅲa,CD62,CD63等)檢測血小板功能及活化情況，有利于血小板無力癥、巨大血小板綜合征及血栓栓塞性疾病的診斷和治療。

血小板相關抗體的測定

FCM可以通過熒光抗體標記測定血小板抗體含量，直接測定血小板表面的相關抗體；間接法可測定血清中的相關抗體[5]。利用FCM對血小板相關免疫球蛋白(PAIg)的檢測對免疫性血小板減少癥的診斷具有一定的價值。
綜上所述
FCM在醫學檢驗與研究中的應用之廣泛是當今先進醫學儀器中屈指可數的，FCM的應用范圍之所以得到飛速擴展主要得益于它的幾個特點：

①FCM能對單一細胞從單色到同時進行多色染色，這也使它區別于傳統的免疫染色法;
②它不僅能測定細胞膜表面標記，還可檢測細胞內成分;
③FCM還可對液體中的可溶性成分(如細胞液中的細胞因子，血液中的自身抗體等)進行分析，只要將液體中的可溶性成分結合到類似于細胞大小的顆粒上，再進行熒光免疫標記即可。
流式細胞技術優勢與特點
流式細胞技術具有操作簡便、快速分析、客觀精確等優點，作為臨床實驗室尖端的檢測技術被廣泛應用，當前流式細胞分析已成為臨床檢驗醫學發展的一個熱點，相信隨著FCM新試劑、新方法的不斷開發和利用，FCM應用領域將會越來越寬廣。