培養細胞不可能24小時值守，快快請出四大護法相助

隔壁的直男師兄今年喜得千金，近總在實驗室詭異地傻笑，問他為何，說是時常想起女兒的可愛模樣。

這種感情，沒養育過孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在實驗室養育細胞，也一樣寄托感情，生怕細胞被養壞了。一個閃失，就前功盡棄。實驗結果不可靠，沒有一致性和穩定性，還重復不出來，再濃密的頭發也經不住這樣的考驗。所以，有一個穩定、一致的培養環境，那就很重要了。
 
培養細胞不可能24小時值守，快快請出四大護法相助！

1. 大護法：二甲基亞砜（DMSO）

成功凍存和復蘇細胞是細胞培養研究的常規操作。細胞低溫儲藏時，防止冰晶形成是維持細胞活力的關鍵。大護法DMSO作為冷凍保護玻璃化劑，可以讓細胞免受冰晶導致的機械損傷。大護法法力無邊，能夠用于原代、繼代培養和重組的異倍體和雜交瘤細胞系、胚胎干細胞 (ESC) 以及造血干細胞的凍存。
 
下面為大家解密DMSO這個既熟悉又陌生的細胞培養大護法～～

1. DMSO的摩爾濃度是多少？

DMSO的摩爾濃度為14.1 M，依據是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。

1. DMSO的來源？

過去，DMSO是從樹皮中分離出來的。現在，它是一種商業合成的溶劑。

1. 細胞凍存培養基中應使用什么濃度的DMSO？

DMSO通常以1-10％的濃度使用，具體取決于細胞系。

1. DMSO應該是液體，為什么我收到后卻是固體？

DMSO的熔點為16-19℃，室溫過低就凝固。這并不妨礙使用，可以緩慢加熱令其重新液化，不會有任何影響。

1. 哪種類型的過濾器可用于無菌過濾DMSO？

DMSO可以用帶0.2 μm PTFE膜的過濾器進行無菌過濾。
 
每個伺候細胞寶寶的“寶爸寶媽”對棕瓶子白蓋子的DMSO應該都不陌生。沒錯！正是Sigma-Aldrich?品牌熱賣的這款DMSO（貨號：D2650）：明星產品，質量過硬，口碑積累，適用性廣，久經驗證。
 

1. 二護法：血清

血清里的生長因子能促進細胞的繁殖，附著因子可促進細胞的貼壁，此外礦物質、脂類及激素對細胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清，公認澳洲來源的血清品質更優、更安全。
 
趕快來了解一下保護細胞寶寶的二護法吧～～

1. 如何解凍血清？

血清應在2-8°C過夜解凍以避免降解，或者在室溫條件下，定期輕輕搖動使組分重懸。解凍的血清在加入細胞培養基前應該混合均勻。反復凍存會嚴重影響血清品質，建議將解凍的血清分裝成單次使用量，并凍存于-20°C。如果儲存于2-8°C的環境中，應該在2-4周內盡快使用。溫度超過37°C時血清會降解，功能遭到破壞。

1. 如果血清收到時存在部分解凍，還能繼續使用嗎？

血清是干冰包裝運輸，到達時應該是冷凍狀態。運輸超期，會部分解凍，但依然可以繼續使用。

1. 培養基中加入血清和所有補充物后可以儲存多久？

如果正確無菌操作，添加血清的培養基可以在2-8°C長儲存6周。不論儲存時間長短，一旦培養基變渾濁，應該使用適當的方法丟棄。

1. 為什么血清會出現渾濁或絮狀物質？

原因很多，主要有二：

1. 反復的凍融會使血清脂蛋白發生變性造成渾濁，所以，一定要分裝哦～～

2. 血清加工中遺留的纖維蛋白原在解凍時會轉化成纖維蛋白，過量的纖維蛋白就呈現為絮狀物。不要著急，可以離心移除；不推薦過濾哦，因為容易堵。

1. 什么是γ輻照的血清？

γ輻照的血清通過暴露于放射性60Co產生的25-40 kGy劑量的γ射線來滅活病毒和其他外來微生物(比如支原體)。γ輻照處理不影響血清的理化性質或細胞培養性能。

1. 為什么有些血清是熱滅活的？如何熱滅活？

哺乳動物血清中天然存在的補體蛋白參與細胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細胞和血小板中釋放組胺和激活淋巴細胞和髓細胞。熱滅活破壞了血清中補體的活性，因此免疫學應用，培養胚胎干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時推薦使用。
熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘，并每隔大約10分鐘旋轉一次瓶子。為了保持準確，可使用一個類似大小的瓶子作為對照，對照瓶內放入同等體積的水，并放置一個溫度計，在溫度到達56°C時開始計時30分鐘。熱滅活過程必須小心控制，避免血清中支持細胞和組織繁殖的關鍵蛋白組分發生降解。

1. 三護法：胰蛋白酶

在細胞培養中，從組織上解離或從貼壁基質上分離細胞的步驟很關鍵，一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于賴氨酸或精氨酸的C末端，在37°C時具有較高的效率，因此使用期前要預熱。當然，高濃度的胰蛋白酶長期孵育會去除細胞表面蛋白而損傷細胞，甚至殺死細胞。看來，這個護法的脾氣可不好哦～～

根據應用和細胞類型的不同，胰蛋白酶的組分和濃度也不同。比如，粘附分子在鈣離子存在時決定細胞-細胞和細胞-基質的相互作用，為了削弱折衷聯系，通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二價陽離子（Ca, Mg）（點擊這里，了解更多：T4049）。

胰蛋白酶的主要來源是豬的胰臟，產品是凍干粉或溶液。為了避免動物或微生物物質，現在也有技術可以在玉米中重組表達牛胰蛋白酶，厲害吧？(點擊這里，了解更多：T3449)。

胰蛋白酶的使用濃度也很有講究。對于強貼壁細胞系，常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果實驗需要細胞表面蛋白完整，則應降低使用濃度（0.05%胰蛋白酶）。
 

1. 四護法：抗生素

細菌寶寶的生存環境這么好，肯定有壞蛋覬覦，這就需要請出四護法——抗生素。

常見的生物污染由細菌、真菌和支原體造成，部分由病毒、化學物和細胞交叉污染造成。抗生素可以控制細胞培養中的生物污染。靈活使用抗生素是控制污染的方法，但千萬不要偷懶，還是要注意無菌操作哦～～

青霉素對大多數革蘭氏陽性菌和少數革蘭氏陰性菌有效，鏈霉素對革蘭氏陰性菌和少數革蘭氏陽性菌有效，聯合使用青霉素和鏈霉素（簡稱雙抗），就能有效控制細胞培養中大多數細菌的污染啦～～

默克旗下有相當靠譜的抗生素。Sigma-Aldrich?品牌熱賣的青鏈霉素溶液（貨號為V900929）不僅性能穩定，；而且還是即用型經典配方（10KU青霉素和10mg鏈霉素/mL），直接以1:100比例添加到培養基中就全搞定！

怎么樣？這四大護法，是不是各個身手不凡呀！有了他們，細胞寶寶就可以健康無憂啦～～

友情提醒，11月起我們會推出四大護法優惠組合套裝，敬請留意~

也歡迎大家在留言區分享自己培養細胞的心得體會～～