鹽析法
利用不同蛋白質在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質。在低鹽濃度下,蛋白質溶解度隨著鹽濃度的升高而增加,稱為鹽溶作用。當鹽濃度不斷升高時,不同蛋白質的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,稱為鹽析作用。這是由蛋白質分子內及分子間電荷的極性基團的靜電引力造成的。由于水中加入了少量的鹽,增加了溶液的極性,減弱了蛋白質分子間的作用力,促使其溶解度增大。當鹽濃度增加到一定程度時,水活度被降低,蛋白質表面的電荷大量被中和,水化膜被破壞,白質分子又相互聚集沉淀析出鹽析法的優點是對設備和條件要求低,安全,應用范圍廣泛,一般可在室溫下操作常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。硫酸銨的鹽析能力強,飽和液濃度大,溶解度受溫度影響小,一般不會使蛋白質變性。缺點是緩沖能力差,pH值常在4.5～5.5。
鹽析時要注意以下幾個問題。
①鹽的飽和度影響 鹽的飽和度是影響蛋白質鹽析的重要因素,不同的蛋白質鹽析所要求的飽和度不同。
②pH值的選擇 蛋白質在等電點(pI)時的溶解度最小,最易從溶液中沉淀析出,因此進行鹽析時的pH值要選擇在被沉淀蛋白質的pI附近。
③蛋白質濃度的影響 在相同鹽析條件下蛋白質濃度越大,越易沉淀。
④溫度的影響 一般可在室溫下進行。