1. 適應證天皰瘡、類天皰瘡、紅斑狼瘡、皮肌炎、皮膚血管炎等免疫性皮膚病。
2. 標本的選擇及取材與皮膚組織病理檢查基本相同。
3. 標本處理①將需要的皮膚標本用手術或鉆孔取下后,立即用OCT復合物包埋劑包埋固 定或將標本用濕潤的生理鹽水紗布包裹,4℃下保存,24小時內用OCT復合物包埋劑包埋。②OCT復合物包埋劑包埋的標本,經速凍后在-22℃~-25℃條件下將組織切成厚度為4~6μm的薄片,置于玻片上。
4. 直接免疫熒光法:將冷凍切片用0.01mol/L、pH7.4的PBS清洗10分鐘,晾干后滴加適當稀釋的熒光標記的抗人免疫球蛋白抗體,在37~C濕盒中孵育30~60分鐘,再用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗滌3次后晾干,用碳酸甘油緩沖液封片,置于熒光顯微鏡下觀察。
5. 間接免疫熒光法:標本來自正常人皮膚或動物組織(如鼠肝印片);首先將滅活的適當稀釋的患者血清滴于標本上,置于37℃濕盒中30~60分鐘,再用0.01mol/L、pH7.4的PBS洗滌3次,晾干,后續步驟同直接法。
6. 鹽裂皮膚免疫熒光法:取患者的皮損或正常人皮膚標本,置于1mol/L的NaCl溶液中,放在4℃冰箱中用磁力攪拌器低速攪動,每24小時換液一次,經過72小時左右,表皮與真皮分離,OCT包埋進行DIF或IIF檢查。