最適生長pH值為4-6。 耐酸生長在pH3.8的環境仍能生長。 該菌株不產氣，在20℃下能生長。
從不同的標本中分離乳酸桿菌時，根據乳酸桿菌所在生境的不同以及是否為優勢菌可選擇不同組分的培養基。比較常用的培養基有MRS（ Man Rogosa Sharpe）培養基、RSMA（ Ruthenium Skim Milk Agar）培養基、番茄汁瓊脂培養基（Tomato Juice Agar）等。常見乳酸桿菌在MRS培養基上的茵落形態：卷曲乳酸桿菌：中間飽滿，周圍彌散，不規則；詹氏乳酸桿菌：飽滿，邊緣規則；格氏乳酸桿菌：扁平，周圍彌散，邊緣規則。