蛋白質測定方法的原理

1、凱氏定氮法

準備4個50mL凱氏燒瓶并標號，想1、2號燒瓶中加入定量的蛋白質樣品，另外兩個燒瓶作為對照，在每個燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物，再加入濃硫酸，將4個燒瓶放到消化架上進行消化。

消化完畢后進行蒸餾，全部蒸餾完畢后用標準鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量，直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色，即為滴定終點，結算出蛋白質含量。

2、雙縮脲法

雙縮脲法是第一個用比色法測定蛋白質濃度的方法，硫銨不干擾顯色， Cu2+與蛋白質的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡合，形成紫藍色絡合物，此物在540nm波長處有最大吸收。

利用標準蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標準曲線，將待測血清與硫酸鈉在待測試管中混合，并只加入硫酸鈉不含血清的試管作對照，將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑，混合后于37℃環境中放置10分鐘，在540nm波長進行比色，以對照管調零，讀取吸光度值，標準曲線上直接查出蛋白質含量。

3、酚試劑法

取6支試管標號，前5支試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液，最后一支試管加待測蛋白質溶液，不加標準蛋白溶液，每支試管液體總量加入蒸餾水補足而保持一致，混合均勻，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，于650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。