①在宿主細胞中能保存下來并能大量復制，且對受體細胞無害，不影響受體細胞正常的生命活動。
②有多個限制酶（Restriction enzymes）切點，而且每種酶的切點最好只有一個，如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點，可適于多種限制酶切割的DNA插入。
③含有復制起始位點，能夠獨立復制；通過復制進行基因擴增，否則可能會使重組DNA丟失。
④有一定的標記基因，便于進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環素抗性基因，就可以作為篩選的標記基因。一般來說，天然運載體往往不能滿足上述要求，因此需要根據不同的目的和需要，對運載體進行人工改建。當前所使用的質粒載體幾乎都是經過改建的。
⑤載體DNA分子大小應合適，以便操作。
基因克隆的載體類型：質粒載體，噬菌體載體，柯斯質粒載體，M13噬菌體載體，噬菌粒載體。