1.血清學診斷
因90%的成年人血清中均有一定水平的抗HSV抗體，即使在復發感染階段，其抗體水平也未必升高，故實用意義不大。
2.檢測包涵體及多核巨細胞
病灶刮片和組織切片用普通染色法檢測嗜酸性核內包涵體和多核巨細胞，如陽性則對臨床診斷有很大支持，此法僅能證實病毒感染而不能區分是否HSV感染。電鏡雖然可看到病毒顆粒的存在，但其取材繁瑣，且電鏡設備昂貴，需有經驗，經特殊培訓的人員，診斷價值較低，不宜廣泛采用。
3.病毒培養
刮取角膜潰瘍邊緣組織，進行小白鼠接種或雞胚囊膜培養或組織培養，不但可分離出病毒，而且還可鑒定出病毒類型，但病毒培養并非易事，且僅適用于上皮型單純皰疹性角膜炎（HSK），對于基質型，內皮型HSK都很難培養出病毒。
4.免疫技術
（1）免疫熒光法 又稱熒光素抗體法，是一種抗原抗體結合反應與形態學相結合的方法，即把抗體標記上熒光素，使與相應的抗原相結合，然后在熒光顯微鏡下觀察顯示熒光的抗原-抗體復合物，此法能快速地將組織或細胞內的病原體或其他抗原成分加以鑒別和定位。
（2）免疫酶染色法 此法簡單，從刮片到觀察結果僅需3小時左右，普通光學顯微鏡即可檢測，因此具有迅速，簡便易行的優點。
（3）放射免疫測定法 是一發展迅速的免疫學檢查方法，又稱核素標記法，其原理是用放射性核素標記抗體（或抗原），再使抗體抗原相結合，以達檢測抗原（或抗體）的目的。
5.聚合酶鏈反應
是一種在體外將特異性DNA序列進行高效擴增的方法，在臨床疾病的病因診斷方面顯示出極大的優勢，對HSK檢測HSV DNA有良好的應用前景。
6.免疫組織化學檢查
使用HSV-1的單克隆抗體診斷藥盒，進行包括免疫熒光染色和酶免疫測定，能在少于4小時內對上皮刮片作病原學快速診斷，結果極為可靠。
7.其他
（1）樹枝狀角膜炎 2%熒光素染色，呈明顯樹枝狀淡綠色著色，故稱樹枝狀角膜炎。
（2）地圖狀角膜炎 病變潰瘍邊緣不整齊，呈灰白色地圖狀或阿米巴形。
（3）盤狀角膜炎 角膜表面粗糙，呈顆粒狀水腫或上皮完整，而基質層則由于浸潤，水腫而增厚，呈毛玻璃樣灰色混濁，病變區多位于角膜中央，呈盤狀，境界清楚，有時可表現為基質的彌漫性浸潤，后彈力層出現皺襞，內皮有水腫；有較多灰色帶色素斑點狀角膜后沉降物。