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  • 發布時間:2023-05-12 09:59 原文鏈接: RNA酶保護實驗(RNaseProtectionAssay,RPA)簡介

    簡介:
    RNA酶保護試驗(RNase Protection Assay,RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交,以檢測RNA表達的技術。

    1. 原理:雙鏈RNA(雜交的)能夠抵抗RNA酶的降解。

    2. 應用:檢測RNA表達

    3. 與Northern雜交和RT-PCR比較,RPA有以下幾個優點:

    (1) 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進行電泳,故損失小,提高了靈敏度。

    (2)由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題,基于PCR產物量進行分析所得數據的可靠性將下降,而RPA沒有擴增過程,因此,分析的數據真實性較高。

    (3)由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進行分析。

    (4)步驟較少,耗時短。與Northern雜交相比,省去了轉膜和洗膜的過程。

    (5)RNA-RNA雜交體穩定性高,無探針自身復性問題,無須封閉。

    (6)一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交,無競爭性問題。

    (7)檢測分子長度可以任意設置,靈活性大。




    4. RPA的缺點是需要同位素標記探針。


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