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  • 發布時間:2023-01-17 10:46 原文鏈接: pcr原始曲線和擴增曲線區別

    擴增曲線可以粗略地判斷擴增效率。SYBR Green的雙delta Ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一致。如果不一致,需要對公式進行修正,部分qPCR儀的配套軟件可以做到,直接輸入每對引物的擴增效率。但無論如何,保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。

    如果擴增效率一致,不同Ct的曲線顯示出來就基本是平行的位移,其傾斜程度基本一致。而如下圖一樣,一條比較“陡”,另一條比較“平”,那么意味著擴增效率不一致。有可能是引物效率不一,或者個別樣品、反應孔存在抑制PCR的污染等。

    溶解曲線分析

    可以用來確定不同的反應產物,包括非特異性產物。擴增反應完成后,通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光信號來產生溶解曲線,隨著反應中雙鏈DNA變性,熒光染料又回復到游離狀態導致熒光信號降低,用熒光信號改變的負的一次導數與溫度作圖,在擴增產物的溶解溫度上有一特征峰,用這個特征峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開,因為它們在不同的溫度溶解。


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