限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphism，縮寫RFLP) 技術的原理是檢測DNA在限制性內切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位點變異的突變如點突變（新產生和去除酶切位點）和 一段DNA的重新組織（如插入和缺失造成酶切位點間的長度發生變化）等均可導致RFLP的產生。
技術路線：
缺點：
RFLP分析對樣品純度要求較高，樣品用量大，且RFLP多態信息含量低，多態性水平過分依賴于限制性內切酶的種類和數量，加之RFLP分析技術步驟繁瑣、工作量大、成本較高，所以其應用受到了一定的限制
RFLP原理圖示：