實驗方法原理
LDH,S-乳酸:NAD+氧化還原物;L-乳酸脫氫酶。
L-乳酸 + NAD + ? 丙酮酸 + NADPH + H +
由于借助 ADH,反應可以從兩個方向檢測,但是對于這個平衡,即使考慮到 NADH 在反應起始時有高吸收值,丙酮酸的還原反應也是首選的。
實驗材料 LDH 稀釋溶液
試劑、試劑盒 磷酸鉀NADH丙酮酸
儀器、耗材 分光光度計
實驗步驟
實驗所需「試劑」具體見「其他」
0.98 ml 實驗混合物
0.02 ml LDH 稀釋溶液
25℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低。NADPH的吸收系數ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事項
其他
試劑:
0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0
0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)
0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸鈉,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。
LDH 原料溶液(從豬心臟提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0 稀