在選擇緩沖液pH值之前,應先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka兩個PH值單位的,有助于獲得好的、尖銳的峰,從公式:pH=pKa+log([A-]/[A])得知,溶液pH值高于或低于pKa兩個單位,化合物中99%以一種形式存在,而一種形式存在的化合物才能獲 得好的尖銳的峰。顯示的是它的離子形式和中性化合物的轉變,苯甲酸的 Pka等于4.2,理論上由HH公示得知,當溶液PH值等于2.2時,99%的苯甲酸以中性化合物存在,PH值等于6.2時99%的苯甲酸以離子形式存在,所以當緩沖液PH值等于2.2時,中性化合物以羧酸形式保 留于反相柱,表1列出了一般緩沖液和他們的緩沖范圍。從表1知磷酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液能用于PH值等于2.2。
當化合物只有氨基時,緩沖體系的選擇十分簡單,大多數氨基化合物在PH值小于9時都被質子化,所以所有PH值在7或更低的溶液均適合應用,你也許會問水的PH值大約是7,為什么還用緩沖鹽,因為緩沖鹽有助于增加方法的可靠性,以及色譜峰的尖銳性,PH值的降低有助于氨基化合物保留的減弱,減小化合物與硅膠表面硅羥基的作用,而使峰更尖銳,從表1可知,任何緩沖液均可應用于氨基化合物的分析,但我們認為PH值等于3的磷酸鉀鹽最適合用于氨基化合物的分析。
在上面兩個例子中,PH=3的磷酸鉀鹽都能獲得良好的應用,在一般情況下,它是含羧基和氨基化合物分析中最好的緩沖液,并且我們認為在氨基化合物分析中鉀鹽比鈉鹽更好。