中國醫學科學院最新文章：RNAi技術解析病毒

　　腸道病毒71型(EV71))已被證明是引起近年來亞洲-太平洋地區頻發的手足口病重癥并導致患者死亡的最主要病原體。但是, 其是如何感染神經系統并導致嚴重神經系統病理損傷的分子機制尚不明確。

　　來自中國醫學科學院&北京協和醫學院，昆明醫科大學等處的研究人員通過RNAi技術對 EV71 病毒感染恒河猴星狀膠質細胞所需細胞磷酸酶譜進行了分析，比較了EV71在該細胞中的增殖特征,并對若干可以通過其表達水平及其活性的變化而直接影響 EV71 增殖的磷酸酶做了進一步分析。

　　結果表明, 恒河猴星狀膠質細胞中若干與調控信號通路相關的酪氨酸磷酸酶和絲/蘇氨酸磷酸酶對 EV71 的增殖具有調控作用, 而病毒亦可能通過與這些磷酸酶的相互作用對所感染的星狀膠質細胞的免疫反應性產生相應的影響。

　　小RNA病毒科成員腸道病毒71型(EV71)作為引起兒童手足口病(hand foot and mouth disease, HFMD)的常見病原體, 同時因其也是該病重癥及死亡病例的主要病原而受到廣泛關注。星狀膠質細胞作為 CNS 中膠質細胞的主要類型, 不僅具有重要的神經組織支持作用, 同時亦具有重要的神經細胞調節作用和免疫反應功能。

　　此前這一研究組已證明, EV71 能夠通過 PSGL-1介導而進入該細胞, 并表現感染增殖過程(數據投稿中)。但此感染過程如何影響該細胞的生理功能尚不清楚. 由于星狀膠質細胞具有較復雜的神經調節功能及免疫反應能力，在這篇文章中，研究人員就進一步探索病毒與該細胞相互作用的基礎, 集中于這類細胞中具有功能調控意義的磷酸化/去磷酸化調控系統。

　　研究人員構建了恒河猴的212個磷酸酶基因的siRNA庫, 并利用這一 siRNA 庫分別下調了分離自恒河猴大腦并經純化培養的星狀膠質細胞內的各磷酸酶的表達, 在分析比較EV71在不同磷酸酶下調細胞中的增殖特征基礎上, 對若干可以通過其表達水平直接影響 EV71 增殖的磷酸酶做了進一步分析。結果表明, 恒河猴星狀膠質細胞中若干與調控信號通路相關的酪氨酸磷酸酶和絲/蘇氨酸磷酸酶對EV71的增殖具有影響, 而病毒可能亦通過與這些磷酸酶的相互作用對所感染的星狀膠質細胞的免疫反應活性產生影響。

　　研究人員指出，這項研究實驗表明, 使用經過綜合質量控制及效果評價而能夠有效下調所有細胞內磷酸酶基因表達的 RNAi 技術, 可以在星狀膠質細胞中尋找并確定對 EV71 增殖具有重要作用的特定磷酸酶。這類磷酸酶包括了酪氨酸磷酸酶、雙特異磷酸酶和絲/蘇氨酸磷酸酶共 11 個, 它們與細胞內多種信號的傳導及由此引起的轉錄調控等過程相關。這些磷酸酶均能單獨對 EV71 的增殖表現控制作用, 提示它們是病毒增殖必需的細胞成分。

　　同時, 這一研究實驗結果還表明, 當 siRNA 干擾下調細胞內這些磷酸酶基因的表達時, 星狀膠質細胞所具有的、在病毒感染刺激時改變某些淋巴因子分泌水平的特征性免疫反應活性亦受到影響, 這些以 IL-6 為代表的淋巴因子的變化, 從另一方面提示了, 星狀膠質細胞內特定磷酸酶在表現對 EV71 增殖的控制作用之外, 亦同時涉及細胞針對病毒感染刺激而產生的, 表現為某些淋巴因子分泌上調的炎性免疫反應。根據這些結果和基于一些臨床報道強調的 EV71 病理損傷涉及 CNS 中炎性反應機制的探討, 可以推論, 星狀膠質細胞中這些對 EV71 具有特定作用的磷酸酶的表達水平和其活性狀態, 很可能在某種意義上影響了病毒感染CNS組織時所產生的, 通常表現為CNS炎性病理損傷的發生和變化機制。這項研究的結果為進一步分析 EV71 感染恒河猴模型, 尤其是探索感染CNS及其所出現的病理損傷的機制, 提供了新的基礎和依據。