人偏肺病毒分離株蛋白質特性的初步探討

【摘要】目的: 初步明確人偏肺病毒( Human metapneumovirus , hMPV) 主要蛋白質的基本特性。方法: 以純化的hMPV 重慶分離株CHN05- 01 滅活病毒為抗原, 免疫家兔獲得抗血清。用此抗血清為一抗通過免疫印跡法檢測hMPV 蛋白。用NetNGlyc 1.0Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos 2.0 Server 分析hMPV A 型標準株CAN97- 83 氨基酸序列, 預測hMPV 蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位點。結果: ELISA 檢測顯示所制備的抗血清與hMPV 的蛋白反應效價達1: 500 以上, 可有效識別hMPV蛋白。軟件分析示G 蛋白糖基化位點最多, 而P 蛋白磷酸化位點最多。以兔抗hMPV 血清為一抗的免疫印跡法提示CHN05- 01的G 蛋白糖基化水平較一致, 與CAN99- 80 和CAN99- 81 不同, 其分子量介于55 至72ku 之間, 約68ku; F 蛋白F1 亞單位分子量介于40 至55ku, 約為48ku。結論: 初步明確了hMPV 兩個主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特點, 為后續蛋白功能研究奠定了基礎。