從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體

細胞

粗勻漿液

塑料離心管

1. 向 6 ml 的粗勻漿液中（細胞收獲后以大約 5X10⁵ /ml 懸于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10  mmol/L pH 7.4 Tris-HCl 的冰浴的 2.3 mol/L 蔗糖，將蔗糖濃度調整到 1.4 mol/L。

2. 加入 100 mmol/L 的 Na₂EDTA 母液并混合使終濃度為 1 mmol/L。

3. 將混合物加入到一只干凈的 SW27 塑料離心管中（例如 polyallomer)，然后用 14 ml 的 1.2 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 覆蓋，再加入 9 ml 的 0.8 mol/L 蔗糖-10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.4)。

4. 將梯度溶液在 SW27 轉頭中以 25000 r/min ( 90000 g) 離心 2.5 小時。

5. 用巴斯德吸管或用注射針頭以最小的體積回收位于 0.8 mol/L/1.2 mol/L 蔗糖界面處的混濁帶，然后可以將膜成分離心沉淀出來。