從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體
實驗材料細胞試劑、試劑盒粗勻漿液儀器、耗材塑料離心管實驗步驟1. 向 6 ml 的粗勻漿液中（細胞收獲后以大約 5X105 /ml 懸于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10 mmol/L pH 7.4 Tris-HCl 的冰浴的 2.3 mol/L 蔗糖，將蔗糖濃度調整到 1.4 mol/L。2. 加入 100 mmol/L 的 Na2EDTA 母液并混合使終濃度為 1 mmol/L。3. 將混合物加入到一只干凈的 SW27 塑料離心管中（例如 polyallomer)，然后用 14 ml 的 1.2 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 覆蓋，再加入 9 ml 的 0.8 mol/L 蔗糖-10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.4)。4. 將梯度溶液在 SW27 轉頭中以 25......閱讀全文
從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體
實驗材料細胞試劑、試劑盒粗勻漿液儀器、耗材塑料離心管實驗步驟1. 向 6 ml 的粗勻漿液中（細胞收獲后以大約 5X105?/ml 懸于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10? mmol/L pH 7.4 Tris-HC
從96孔微培養板生長的哺乳動物細胞中分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改進而成，是一種從微培養板的每個孔生長的真核細胞抽提基因組 DNA 的簡便有效的方法。每個孔產生的基因組 DNA 足以做數次聚合酶鏈反應（PCR) 或者一次
從哺乳動物細胞或組織分離DNA
1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌 2 次，用刮棒把細胞刮入約 0.5 ml 的 TBS 中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，用 1 mlTBS 沖洗培養皿，并入離心管中的細胞懸液。于 4℃ 以
從96孔微培養板生長的哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理 本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改進而成，是一種從微培養板的每個孔生長的真核細胞抽提基因組 DNA 的簡便有效的方法。每個孔產生的基因組 DNA 足以做數次聚合酶鏈反應（PCR) 或者一次 Southern 雜交。對于制備用于 PCR 反
從96孔微培養板生長的哺乳動物細胞中分離DNA
本方案由 Ramirez-solis 等的方法 1992，1993 改進而成，是一種從微培養板的每個孔生長的真核細胞抽提基因組 DNA 的簡便有效的方法。每個孔產生的基因組 DNA 足以做數次聚合酶鏈反應（PCR) 或者一次 Southern 雜交。對于制備用于 PCR 反應的基因組 DNA 的最佳
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇的液體緩沖液。
純化DNA實驗_從哺乳動物細胞或組織分離DNA
基因純化，可以用于（1）對大量提取的質粒DNA進行純化；（2）常用的方法有柱層析法和氯化銫梯度離心法。實驗材料細胞試劑、試劑盒TBS抽提緩沖液儀器、耗材離心管實驗步驟1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境 1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規
從植物組織中分離高爾基體
實驗材料新鮮組織試劑、試劑盒勻漿介質儀器、耗材研缽和杵離心機實驗步驟1. 先用剪刀大致剪切葉片或莖桿，然后在少量的介質中用刀片切成碎片。2. 對于 1 g 新鮮組織，在 1 ml 介質中用研缽和杵搗碎使組織勻漿化。勻漿介質：50 mmol/L FiEPES10 mmol/L KCI1 mmol/L
哺乳動物細胞總RNA的分離
實驗概要本實驗介紹了從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序，該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解細胞的方法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K消化)去消化組織速度很慢，導致內源性RNA酶在被蛋
哺乳動物細胞總RNA的分離
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項 這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解
哺乳動物細胞培養過程－－培養條件
哺乳動物細胞培養過程哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各個過程進行簡述：原代培養：從動物機體取出組織后切碎，經過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結合機械方法（吸液管反復吸吹）處理，分散成單細胞，置于
哺乳動物細胞培養過程－－培養條件
哺乳動物細胞培養過程 & 培養條件導語：哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。哺乳動物細胞培養過程哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取，原代培養，傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各
哺乳動物細胞總RNA快速分離
試劑、試劑盒 尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 EDTASDS 乙酸鈉水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL實驗步驟 一 材料與設備1)尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 (PBS)? ??2)10 mmol/L ?EDTA (pH8.0 )? ??3)0.5% SDS ??4)0. l mol/L 乙酸鈉（p
哺乳動物細胞總RNA快速分離
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 EDTA SDS 乙酸鈉 水平衡的苯酚 ?乙醇 Tris-Cl ?NaCL
用甲酰胺從哺乳動物細胞中分離高分子質量DNA
實驗方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質-DNA 復合物并使蛋白變性和釋放，但他并不明顯影
用甲酰胺從哺乳動物細胞中分離高分子質量DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質
用甲酰胺從哺乳動物細胞中分離高分子質量DNA
本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質-DNA 復合物并使蛋白變性和釋放，但他并不明顯影響蛋白酶 K 的活性。本實
哺乳動物細胞的細胞培養
實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒
哺乳動物細胞胞質RNA的分離
試劑、試劑盒 冰冷的磷酸鹽緩沖液 NaClKCl Na2HP04?7H20 KH2PO4 冰冷的裂解緩沖液： LTris-HCl NaCl MgCL2 NkmidetP-40 胎盤 RNase 抑制劑 SDS 蛋白酶 K 酚 氯 仿 異戊醇 乙酸鈉 (DEPC 處理） 無水乙醇 乙醇 乙酸鈉
哺乳動物細胞胞質RNA的分離
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 冰冷的磷酸鹽緩沖液 NaCl KCl Na2HP04?7H20 KH2PO4 冰冷的裂解緩沖液： LTris-HCl
2.1.2－哺乳動物細胞總RNA快速分離
利用 SDS 裂解細胞 ，并用酸性苯酚分級提取細胞總 RNA, 這是一種適合于處理 mRNA 含量相對較低、內源性 RNase 活性較髙的細胞的方法，該方法 RNA 損失極少，簡便易行 ，可同時處理多個樣品。對大多數細胞株來說，在一個直徑 90mm 培養皿中培養細胞 ，其 RNA 收率為 100?2
哺乳動物細胞的細胞培養溫度
維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度；不同種類的細胞對培養溫度要求也不同。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能
2.1.3－哺乳動物細胞胞質RNA的分離
下述方法是純化組織培養細胞胞質 RNA 的 簡便并行之冇效的方法 ，此方法出現在 RNA 分離的較早階段，主要步驟即離心去除細胞核試劑、試劑盒冰冷的磷酸鹽緩沖液NaClKClNa2HP04?7H20KH2PO4冰冷的裂解緩沖液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盤RNas
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
實驗方法原理 實驗材料 轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒 PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材 貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Doun
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
核提取物的制備核提取物制備優化細胞質（S-100)組分的制備實驗方法原理實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒PBS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?