使用Trizol純化RNA實驗

磨細的組織

Trizol氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水

一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
Trizol(Invitrogen)
氯仿
異丙醇
乙醇，75%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 處理過的水配制
DEPC 處理過的水
2. 細胞和組織
50~100 mg 已磨細的組織
二、方法
1. 將 lmlTrizol 加到含 50?100 mg 磨細組織的微董離心管中。室溫下溫育 5 min。
組織被磨細有助于 Trizol 將其裂解，這一點很重要。
2. 加 200ul 氯仿，將管顛倒數次以混合。
不推薦進行振蕩，因之可導致基因組 DNA 的剪切和 RNA 制備物中 DNA 污染過多。
3. 室溫溫育 3 min，1500 g 離心 15 min。
4. 將液相轉移到一新管。加 500ul 異丙酵。室溫溫育 l0 min。
5.1500 g 離心 l0miri。RNA 將可見于管底。
6. 移棄上清，小心避免擾動沉降物。
7. 加 1 ml75% 的乙醇。重懸 RNA。4°C 下 1500 g 離心 5 min。
8. 移棄乙醇并風干 RNA。
9.RNA 溶解于 DEPC 處理過的水中。
當使用以酚為基礎的試劑時，為得到足夠高的純度，對得到的 RNA 進行笫二輪酚-氯仿抽提可能是必
要的。