免疫膠體金銀染色和其它免疫細胞化學方法一樣，要想得到好的染色效果，關鍵取決于標本處理是否合適，只有使抗原性及組織結構保存的好，才能使以后的染色成功成為可能，其次要用高特異性和高效價的一抗，選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應用于不同的生物學科，所要檢出的抗原種類繁多，性質也各不相同。因此，不可能有一種適用于所有抗原的固定劑，而是根據不同的抗原性質區別對待。根據我們使用的固定劑介紹如下，供參考。
一、固定劑的選擇及固定時間(詳見表5-9)
(1)Karovsky's 液pH7.3。
(2)PAP液(Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制見附錄一。
表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時間
| 待檢抗原 | 固定劑的種類 | 固定時間 |
| 蛋白質 | ||
| 酶 | 冰凍切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液 | 10 min |
| 激素 | 冰凍切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲 | 10 min |
| 醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定 | 4℃30 min | |
| 免疫球蛋白 | 中性福爾馬林，四氯化碳（1%甲醛） | 30 min |
| 白蛋白 | 95%乙醇含1～5%冰醋酸 | 30 min |
| 纖維蛋白元 | 同上 | 30 min |
| 病毒 | 丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚 | 30 min |
| 糖蛋白 | PLP，丙酮 | 30 min |
| 脂質Forssman | 中性福爾馬林 | 20 min |
| 抗原 | 2.5%硫代硫酸鈉，冰凍切片不固定 | 20 min |
| 免疫電鏡 | PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等 | 30min |
二、切片的處理與粘附。
免疫組化染色過程較長，洗的次數很多，而且均在振蕩洗滌，抗原片附貼不緊，往往在最后的時刻，還沒有等顯色就會脫落導致前功盡棄，這個環節 雖小卻會影響大局，因此，為了保證切片染色成功必須把切片處理好，解除掉片的后顧之憂
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