細胞常規培養是在細胞房中進行,在超凈工作臺或生物安全柜中,把細胞處理好,根據需要加入細胞培養基,放入細胞培養瓶/皿或細胞培養板中,再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。
細胞培養4要素
1.類型:懸浮細胞/貼壁細胞
2.培養基:(無)血清/Buffer/抗生素/無菌過濾
3.培養環境:CO2濃度/O2濃度
4.培養耗材:處理&未處理表面/特殊包被
流程:
1. 剪切組織 先將所取得的組織清洗剪切至糊狀,靜置片刻后,用吸管吸去上層液體,加入適當的緩沖液再清洗一次。
2. 消化分離 消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞,以利于進一步的培養,常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3. 培養 細胞懸液用計數板進行細胞計數。用培養液將細胞數調整為實驗所需密度,分裝于培養皿/培養板/培養瓶中。置CO2培養箱內,5%CO2,37℃靜置培養。一般3~5d,原代培養細胞可以黏附于瓶壁,并伸展開始生長,可補加原培養液量1/2的新培養液,繼續培養2~3d后換液,一般7~14d可以長滿瓶壁,進行傳代。
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