化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志的性能探討

　　乙型肝炎病毒屬于嗜肝DNA病毒科，是一種DAN病毒，易感染群體為人類和大猩猩，是引發乙型病毒性肝炎的主要病毒[1]。相關臨床數據調查顯示我國乙型肝炎感染率為60%～70%，約有7%的人口攜帶乙肝表面抗原，照此計算，我國約有9300萬人攜帶乙型肝炎病毒[2]。早期我國臨床多采用酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志，檢測準確性較低。隨著醫學技術的不斷進步，近年來化學發光技術被廣泛應用于乙型肝炎病毒感染血清學標志檢測中，筆者所在醫院本次針對光激化學發光法在乙型肝炎病毒感染血清學標志檢測中的應用性能進行了研究和評價，現做出以下整理報道。 
　　1 資料與方法 
　　1.1 一般資料 
　　納入2014年9月-2015年2月來筆者所在醫院接受體檢的60例乙型肝炎病毒感染患者參與本次研究，60例患者中，男32例，女28例，年齡19～71歲，平均（42.4±1.5）歲。60例患者均在參與研究前詳細知曉筆者所在醫院本次研究內容，為自愿性參與本次研究，且在參與研究前均已簽署臨床研究知情同意書。 
　　1.2 研究方法 
　　1.2.1 血液樣本 于清晨采集60例患者的空腹靜脈血，使用離心機以3000 r/min的速度分離血清，并保存在零下4 ℃的冰箱中待測。乙型肝炎病毒五項血清學標志包括HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、抗HBs（乙型肝炎表面抗體）、HBeAg（乙型肝炎e抗原）、抗HBe（乙型肝炎e抗體）和抗HBc（乙肝核心抗體）。 
　　1.2.2 儀器及試劑 光激化學發光法所使用的檢測儀器為博陽生物科技（上海）有限公司生產的高通量免疫分析儀、儀器配套試劑和全自動移液器。化學發光微粒子免疫分析法所使用的檢測儀器為美國雅培制藥有限公司診斷產品部生產的i2000SR免疫發光檢測儀和儀器配套試劑。分別使用上述兩種儀器檢測 
　　60例乙型肝炎病毒感染患者的五項血清學標志。 
　　1.3 陽性判定標準 
　　1.3.1 光激化學方光 抗HBc：>5.3 PEIU/ml；HBsAg：>0.2 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 PEIU/ml；抗HBe：>2 PEIU/ml。 
　　1.3.2 化學發光微粒子免疫分析法 抗HBc：>1 S/CO；HBsAg：抗>0.5 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 S/CO；抗HBe：<1 S/CO。 
　　1.4 統計學處理 
　　采用SPSS 22.0軟件對所得數據進行統計分析，計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。 
　　2 結果 
　　檢測發現光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染患者血清學標志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的陽性率分別為91.7%、88.3%、93.3%和86.7%，與采用化學發光微粒子免疫分析法檢測的93.0%、85.0%、90.0%和91.7%比較差異均無統計學意義（P>0.05），但檢測抗HBc的陽性率為63.3%，明顯低于化學發光微粒子免疫分析法的85.0%，兩者比較差異有統計學意義（P<0.05），具體見表1。 
　　3 討論 
　　酶聯免疫吸附法為我國臨床檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志的常用方法，該種檢測方法所具有的臨床優勢主要表現為可以最大程度的避免對環境和患者機體的危害、操作簡單、試劑有效期長，但因其靈敏度重復性較化學發光法差，酶純度和反應過程易受到環境的影響，假陽性檢出率和漏檢率較高，現階段逐漸被化學發光法所取代[3]。目前臨床上比較常用的化學發光法主要為光激化學發光法[4]。光激化學發光法的檢測原理為單線態氧分子能量傳遞發光免疫分析技術，并在此技術上應用了納米級顆粒，不僅可以有效增加生物分子的包被面積，同時納米級顆粒可在液相中保持穩定的懸浮狀態，能夠借助結合發光原理進行免清洗和均相檢測。此外，該種檢測技術還應用了鏈霉親和素-生物素放大系統，該系統的作用是促使單位體積中的生物分子濃度提高，以實現提高檢測物質敏感性，減少試劑用量的目標[5]。 
　　總結光激化學發光法的應用優勢主要包括以下幾點，（1）均相反應：酶聯免疫吸附法和化學發光微粒子免疫分析法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志均為非均相反應，該種反應方法存在的缺點為反應時間長、反應體系溫度欠均勻和反應不充分。而光激化學發光法檢測過程中的反應過程均為均相反應，與非均相反應相反具有反應時間短、反應體系溫度均勻、反應充分等優勢，可有效提高檢測結果的準確性[6]。（2）可免清洗：由于光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志的均相反應過程中應用了結合發光原理，因此無需進行清洗分離，即可有效避免均相反應過程中的交叉污染和隨機誤差。（3）使用試劑量少：實踐應用發現，光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志時，每個檢測指標僅需使用25 μl試劑，在一定程度上提高了小樣本檢測小型化、芯片化和高通量的可能性[7]。（4）敏感性：光激化學發光法應用了納米級顆粒，不僅增加了均相反應的表面積，同時還有效提高了檢測過程的敏感性，縮短了檢測時間[8]。 　　分析光激化學發光法在檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志抗HBc時存在應用局限性的原因主要為以下幾點：（1）光激化學發光法與化學發光微粒子免疫分析法選擇HBc原材料和溯源選擇存在一定程度的差異；（2）光激化學發光法與化學發光微粒子免疫分析法的檢測原理不同，光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志抗HBc的原理為競爭法，化學發光微粒子免疫分析法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志抗HBc的原理為夾心法，當兩種檢測方法的檢測結果出現差異時，檢驗者可采用第三種檢測方法進行驗證。筆者所在醫院本次研究因檢測樣本數量有限，未能進行第三方驗證。（3）本次研究發現，光激化學發光法乙型肝炎病毒感染血清學標志抗HBc的檢出能力不足，還有待進一步提高，但在檢測其他乙型肝炎病毒感染血清學標志時符合率很高。 
　　筆者所在醫院本次對光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志的性能進行研究發現采用光激化學發光法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的陽性率與化學發光微粒子免疫分析法比較，差異均無統計學意義（P>0.05），但檢測抗HBc的陽性率卻明顯低于化學發光微粒子免疫分析法（P<0.05）。該研究結果表明雖然光激化學發光法實現了均相、快速、少量試劑、免洗檢測，但在應用性能上仍存在一定的不足，需要臨床進一步深入研究和改進，以進一步提高臨床檢驗結果的準確性。