十大暢銷，大分子藥物占80％，你的制藥方案夠全面嗎？

　　抗體藥經過 30 余年的發展，已成為全球醫藥市場的重要組成部分，目前大分子生物制藥市場（包括重組蛋白類藥物）急速增長已突破千萬億美元。從 2017 年市場表現來看，全球 10 大最暢銷藥物中：除 2 個小分子藥物以外，另外 8 個都是大分子藥物，包括 6 個抗體藥物和 2 個融合蛋白。其中藥王“Humira”銷售額高達 184 億美元，上市 16 年來累計為 Abbvie 貢獻了 1120 億美元銷售額。

　　近年來新型腫瘤免疫調節抗體藥物（如 PD-1/PD-L1 阻斷劑）的興起也帶來了新的治療突破，其中由 BMS 研發的第一個針對 PD-1 的治療型抗體 Opdivo，以近 60 億美元上榜前 10 名。

(以上銷售數據來源于網絡)

　　在藥物研發方向，生物大分子藥物市場高度集中，巨頭壟斷地位“超然”，而同時生物制藥市場也孕育著諸多新機會和變化，新靶點、新作用機制的抗體藥層出不窮，研發企業在生物制藥領域大有可為。針對生物大分子制藥研發流程的每一個環節，珀金埃爾默公司可提供覆蓋分子-細胞-活體-組織的全方位檢測技術、儀器平臺、試劑耗材及相關服務。

　　針對雜交瘤、噬菌體或人源 B 細胞等不同文庫的抗體篩選，高通量多模式檢測系統、多標試劑（如高靈敏度免洗 Alpha 技術）及細胞株、高內涵細胞顯微成像系統、自動化樣品處理工作站可以在分子及細胞水平提供最佳的高通量抗體篩選及優化方案。對于抗體藥物的臨床前/臨床功能驗證、安全評價及治療效果，可借助生化檢測及分子影像學平臺，完成從分子機制、細胞信號通路、組織微環境及整體動物水平的系統評價。

　　針對抗體工藝開發及生產質控過程中的抗體純度、糖基化、片段化/聚合化、荷電異質性及宿主細胞殘留等重要質控指標，全自動毛細管電泳抗體分析系統和多模式檢測及專業試劑盒可大大降低該環節的技術成本。另外，隨著醫療大數據時代的到來，珀金埃爾默 Signal 數據挖掘分析系統，結合高質量顯微成像技術和數字定量病理智能算法，為基礎研究到臨床實踐的轉化進一步助力加速。

　　該應用方案將涵蓋：

　　● 體外抗體高通量篩選及優化

　　● 體外抗體功能性評價及研究

　　● 動物活體水平抗體治療評價

　　● 臨床組織病理抗體診斷治療

體外抗體高通量篩選及優化

　　*部分摘錄

　　抗體篩選方法學對比及檢測

　　抗體的篩選鑒定中，最經典的方法是 ELISA 方法，通過將抗原包被到微孔板中，加入待測抗體（雜交瘤上清或噬菌體裂解液），經孵育后洗去非結合抗體，再加入檢測抗體進行評價。ELISA 方法的需要固定抗原，反復洗板去除多余的抗原/抗體，步驟繁瑣，檢測動態范圍低，且不利于微型化，并且對于一些膜蛋白靶點，抗原固定化后會影響其天然構象及表位，阻礙對針對天然表位的有效抗體的發現及研發。

　　*部分摘錄

　　人源 B 細胞抗體整合方案實例

　　人源 B 細胞抗體篩選是一種新型的人源化抗體篩選平臺，特別是針對感染性疾病研究，人源 B 細胞抗體篩選具有天然宿主優勢。美國 AIMM Therapeutics 公司建立了人源 B 細胞培養、抗體篩選、B 細胞克隆鑒定及中和性抗體功能性驗證平臺，篩選中和性抗體用于治療梭狀芽孢桿菌（C. difficile）感染引起的結腸炎。

體外抗體功能性評價及研究

　　*部分摘錄

　　免疫細胞對腫瘤細胞殺傷活性檢測

　　（ADCC/ADCP/CDC）實例：羅氏集團的科研團隊在 2016 年 PLos ONE 雜志上發表的文章中，使用高內涵系統 Operetta 對 CD44 治療抗體介導的巨噬細胞吞噬過程，進行了長達 10 個小時的實時檢測（如下圖）。圖中綠色為 CMFDA Green 標記的腫瘤細胞，黃色為 CMTMR Orange 標記的巨噬細胞，圖中白色箭頭處可觀察到被巨噬細胞吞噬的腫瘤細胞，通過 Harmony 分析軟件可對連續觀測的圖像進行定量分析，以實時比對 CD44 抗體處理組與空白組相比巨噬細胞對腫瘤細胞的殺傷效果。

　　*部分摘錄

　　基于 QbD 原則的單抗藥物高效工藝開發

　　于生物制品的特殊性，在抗體篩選、優化過程中，除了關注其各項生物學、免疫學特性，更需充分理解環境、工藝步驟及過程對產品純度、雜質及各項理化特性的影響，以保障最終產品的質量可控。因此，FDA 提出的 QbD（Quality by Design）原則，我國的《生物類似藥研發與評價技術指導原則》也對抗體藥物的工藝開發提出了更高的要求。由此，高通量、微量化的表達、純化及分析檢測技術，成為高效、可靠、快速、節省的抗體藥研發必不可少的工具。

動物活體水平抗體治療評價

　　*部分摘錄

　　小動物光學成像技術在活體水平對藥物研發的應用

　　主要可以分為以下 3 個方向：

　　● 建立疾病動物模型，對腫瘤、炎癥、感染性疾病、神經性疾病等的治療藥物進行藥效學評價；

　　● 對治療藥物在動物體內的靶向分布、組織代謝及降解過程等進行研究；

　　● 對治療藥物進行整體動物毒性及毒理機制研究。

　　*部分摘錄

　　免疫檢驗點抗體藥物聯合治療研究實例

　　Michael Lim 等人在 2017 年 Clinical Cancer Research 雜志上的文章中，首次使用 PD-1 阻斷抗體、TIM-3 阻斷抗體和傳統放療（stereotactic radiosurgery, SRS） 三種方式聯合，在小鼠神經膠質瘤模型上，評價不同組合聯合治療的效果，如下圖數據所示，使用三種方式聯合治療能顯著提高小鼠的生存時間，并且通過 IVIS 成像系統檢測發現，第 14 天以后治療組已檢測不到 GL261-luc2 細胞的生物發光信號。

臨床組織病理抗體診斷治療案

　　*部分摘錄

　　Phenoptics? 組織微環境景觀分析方案

　　Phenoptics? 組織微環境景觀分析方案是珀金埃爾默推出的新型定量病理分析技術，借助多色標記免疫熒光染色、光譜成像信號拆分和智能定量病理分析三方面的技術突破，實現了組織原位的多標記定量統計分析，將組織形態學和表型識別統計完美的融合在一起，在腫瘤免疫和腫瘤微環境研究中有著重要的意義和應用前景。

　　*部分摘錄

　　TMA 八色復染評測腫瘤微環境實例

　　使用多色免疫熒光 Opal? 染色技術，可對 TMA 樣品進行免疫檢驗點 PD-1、PD-L1、OX40、CD27、TIM、CD3、腫瘤標志物和 DAPI 等八種顏色同時復染，與傳統三色以內 IHC 方法相比，可在有限臨床樣本內，獲得更多、更準確的有效信息（下圖 A）。對 TMA 復染樣品進行多光譜成像及智能定量分析后，得到不同類型腫瘤患者的免疫檢驗點蛋白表達譜，這些信息是接受免疫檢驗點抗體藥物治療后腫瘤微環境表征的重要指標，也是設計更有效的免疫治療藥物，進行精準治療的重要信息源。

　　TMA：Tissue Microarray

　　*部分摘錄