解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽的骨髓瘤細胞融合，獲得了可以產生單克隆抗體的雜交瘤細胞，從而建立了單克隆抗體制備技術。
通過該技術融合形成的雜交瘤(hybridoma)，既具有骨髓瘤細胞大量擴增和永生的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗體的能力。每個雜交瘤細胞由一個B細胞融合而成，而每個B細胞克隆僅識別一種抗原表位，因此經篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成和分泌識別單一抗原表位的特異性抗體，稱為單克隆抗體。
其優點是結構均一、純度高、特異性強、效價高、血清交叉反應少、制備成本低；缺點是鼠源性mAb對人具有較強的免疫原性，反復免疫人體后可誘導產生人抗鼠抗體，從而削弱了其作用，甚至導致機體組織細胞的免疫病理損傷，因此需要進一步通過抗體工程技術制備人一鼠嵌合抗體、人源化抗體或人源抗體。