單克隆抗體的概念
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽的骨髓瘤細胞融合，獲得了可以產生單克隆抗體的雜交瘤細胞，從而建立了單克隆抗體制備技術。通過該技術融合形成的雜交瘤(hybridoma)，既具有骨髓瘤細胞大量擴增和永生的特性，又具有免疫B細胞合成和分泌特異性抗體的能力。每個雜交瘤細胞由一個B細胞融合而成，而每個B細胞克隆僅識別一種抗原表位，因此經篩選和克隆化的雜交瘤細胞僅能合成和分泌識別單一抗原表位的特異性抗體，稱為單克隆抗體。其優點是結構均一、純度高、特異性強、效價高、血清交叉反應少、制備成本低；缺點是鼠源性mAb對人具有較強的免疫原性，反復免疫人體后可誘導產生人抗鼠抗體，從而削弱了......閱讀全文
單克隆抗體的概念
單克隆抗體單克隆抗體（Monoclonal Antibody，McAb）即單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體。抗體主要由機體的B淋巴細胞合成，每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成該細胞的子孫，即克隆
單克隆抗體的概念
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽
單克隆抗體的基本概念
動物脾臟有上百萬種不同的 B 淋巴細胞系,選擇性表達出不同基因的 B 淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時,抗原分子上的許多決定簇分別激活各個表達不同基因的 B 細胞。被激活的 B 細胞分裂增殖形成效應B 細胞(漿細胞)和記憶 B 細胞,大量的漿細胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（三）
單克隆抗體雜交瘤技術基本流程單克隆抗體的制備步驟1、免疫原的制備；2、免疫動物 ；選擇體重18-20g BALB/C 雌性小鼠用于免疫。50-100ug抗原/只與等體積福氏完全佐劑混合，充分乳化后，經背腹部皮下多點注射及腹腔注射相結合的方式免疫，總的免疫體積0.2-0.3ml每只；間隔3周，取與
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（二）
構成抗原的條件：一、異物性，又稱為異質性或異源性正常情況下，自身組織或細胞對機體本身無免疫原性。而異種或異體物質，以及化學組成或結構發生改變的和由于某種因素而暴露的在胚胎期與免疫系統隔絕的自身物質則為良好的抗原。二、理化性狀大分子物質抗原的免疫原性與其分子大小有直接關系：1、免疫原性良好的物質分子量
抗體的概念、動物產生抗體的機理及單克隆抗體...（一）
抗體的概念動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) ?是指存在于人和動物血液(血清)、組織液及其它外分泌液
抗體的概念動物產生抗體的機理及單克隆抗體的制備方法
抗體的概念 動物機體受到抗原物質的刺激后, 由B淋巴細胞轉化為漿細胞產生的, 能與相應抗原發生特異性結合反應的免疫球蛋白, 這類免疫球蛋白稱為抗體(Antibody,簡稱 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 簡稱Ig) 是指存在于人和動物血液(
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
單克隆抗體培養—含有單克隆抗體的腹水制備
實驗步驟材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)裸 鼠 ， 6?8 周齡，無 特 殊 病 原（SPF)，或者是同基因型宿主（注射小鼠-小鼠雜交瘤時）姥 鮫 焼（Pristane， 2,6，10，14-四甲基十五焼； Aldrich 公司提供）雜 交 瘤（單 元 1.3)添 加 10 mmol/L H
單克隆抗體
·?????????Tips and hints for the storage of antibodies?(Synaptic Systems)·?????????Purification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose(KPL)·????
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。(2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。(4)由于單克
單克隆抗體的制備
實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（或
單克隆抗體的簡介
1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細
單克隆抗體的概述
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。[1] 它通常采用雜交瘤技術來制備，將具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，從根本上解決了在抗體制備中長期存在的特異性和可重復性問題，可直接用于疾病的診斷、預防、治療以及免疫機制的研究。
單克隆抗體的定義
由單一克隆B細胞針對單一抗原表位產生的均一性的高特異性的抗體稱為單克隆抗體。
單克隆抗體的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩
單克隆抗體的定義
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群,可制備針
單克隆抗體的制備
實驗方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 將抗原免疫過的小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞（P3. 653 )進行融合。用 HAT 選擇性培養基篩選雜合的克隆株（雜交瘤細胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 對上清液進行篩査（ELISA 篩査方法必須在融合前就已掌握），然后對理想的雜交瘤細胞加以擴增、冷凍和
單克隆抗體的簡介
1975年分子生物學家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術的基礎上，創建立雜交瘤技術，他們把可在體外培養和大量增殖的小鼠骨髓瘤細胞與經抗原免疫后的純系小鼠B細胞融合，成為雜交細胞系，既具有瘤細胞易于在體外無限增殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。將這種雜交瘤作單個細
單克隆抗體的純化
一、腹水型單抗的純化?在單抗純化之前，一般均需對腹水進行預處理，目的是為了進一步除去細胞及其殘渣、小顆粒物質、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡便。?1、二氧化硅吸附法?新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min 15分鐘，除去細胞成分（
單克隆抗體的優點
(1)雜交瘤可以在體外“永久”地存活并傳代，只要不發生細胞株的基因突變，就可以不斷地生產高特異性、高均一性的抗體。 (2)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。 (3)由于可能得到“無限量”的均一性抗體，所以適用于以標記抗體為特點的免疫學分析方法，如IRMA和ELISA等。
單克隆抗體的純化
實驗方法原理 葡萄球菌蛋白 A 可以結合數種哺乳類動物的免疫球蛋白。蛋白質 A-瓊脂糖介質可以結合部分 IgM、大部分 IgGl 及幾乎所有的 IgG2a、IgG2b 和 IgG3 MAb。實驗材料 腹水（單克隆抗體）試劑、試劑盒 蛋白 A-瓊脂糖 CL-4BTr1s 緩沖液 pH 8.6檸檬酸鹽緩
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體技術
實驗原理 B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養 基（HAT）阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產生抗體，又能無限增殖，并以此生產抗
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂；而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產
單克隆抗體的方法特點
解決多克隆抗體特異性不高的理想方法是制備識別單一表位特異性的抗體。如果能獲得僅針對單一表位的漿細胞克隆，并使其在體外擴增分泌抗體，就有可能獲得單一表位特異性的抗體。然而，漿細胞在體外的壽命較短，難以培養。為克服這一缺點，Kohler和Milstein將可產生特異性抗體但短壽的B細胞與不產生抗體但長壽
單克隆抗體的功能特點
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針
單克隆抗體的制備步驟
過程1）免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內直接免疫法。2）骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前，骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選，防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性（恢復HGPRT的活性的細胞