實驗概要
一種簡單快速提取單頭小型昆蟲基因組DNA的方法。
主要試劑
1. 蛋白酶K[美國Merck公司]
2. 三羥甲基氨基甲烷(Tris)[美國Amresco公司]
3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]
4. 瓊脂糖及溴化乙錠(EB)[美國Amresco公司]
5. 乙二胺四乙酸鈉(Na2EDTA)[美國Amresco公司]
6. 電泳緩沖液TBE：濃貯存液5×TBE：54.0 g Tris堿，57.1 g硼酸，20 ml 0.5 M EDTA，pH=8.0，加蒸餾水定容至1 L，工作液為稀釋的0.5×TBE
7. 裂解液成分：50 mM KCl，10 mM Tris pH 8.4，0.45％ Tween 20，0.2％ gelatin，0．45％ NP40，60 μg/ml proteinase K
主要設備
1. 高速冷凍離心機(3K-30)[德國Sigma公司]
2. 恒溫水浴鍋[北京六一儀器廠]
3. 電泳儀[美國Bio-Rad公司]
4. 水平電泳槽[美國Bio-Rad公司]
5. 凝膠成像系統(Gel Doc EQ)[美國Bio-Rad公司]
6. 4℃、-20℃冰箱[日本Sanyo公司]
7. 紫外分光光度計(Beckman Du 650)[日本Sanyo公司]
8. 高壓滅菌鍋[日本Sanyo公司]
實驗材料
煙粉虱成蟲
實驗步驟
1. 吸10μL裂解液于封口膜上，將一頭煙粉虱置于提取液中，用0.2 ml PCR管底部將煙粉虱充分研磨勻漿；
2. 把勻漿液吸入1.5 ml離心管中，再取15 μL裂解液清洗封口膜研磨處，將清洗液與勻漿液合并；
3. 65℃水浴30分鐘，將離心管從水浴鍋中取出；
4. 接著沸水浴10分鐘，使蛋白酶K失活；
5. 短暫離心后，每管加入25 μLddH2O，即可用于PCR反應，或儲藏于-20℃冰箱中。
6. 吸取1 μL的DNA樣品，加水稀釋50倍至50 μL至充分混勻，放置于比色皿中，以50 μL純水作為對照校正零點，然后檢測待測樣品的OD260/280值。
7. 利用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA提取結果
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