南蛇藤提取物藥理作用及誘導胃癌細胞凋亡研究

南蛇藤是我國民間常用的一種植物藥，一些初步的藥理研究實驗證實其中某些成分具有較強的抗腫瘤活性。如建立人胃癌裸鼠移植瘤模型可探討南蛇藤莖醋酸乙酯提取物(COE)對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠移植瘤生長及凋亡的相關蛋白p53、Bcl-2、Bax表達的影響，一些生物醫藥公司提供蛋白表達外包服務。

癌癥是困擾當前醫學界的重點難題，其易反復、不易根除、對病患影響極大，一旦病癥爆發往往危及患者健康乃至生命。相關學者經過醫學研究對于對于癌癥細胞與相關蛋白表達的關系有了更深層次的理解。想要徹底根除癌癥細胞，需要反復試驗、多次臨床觀察，在進行腫瘤細胞生長及凋亡相關蛋白表達的研究中，有研究人員會委托其他機構進行蛋白表達外包。

重組蛋白表達技術現已在生物學各個具體領域應用廣泛，尤其是蛋白質的大規模生產和體內功能研究都需要應用重組蛋白表達載體。美迪西提供蛋白表達服務，其擁有多種蛋白表達系統，包括原核蛋白表達系統、酵母蛋白表達系統、昆蟲細胞蛋白表達系統（桿狀病毒）和哺乳動物細胞蛋白表達系統，具備多種融合技術，可以為客戶在蛋白表達與純化方面提供多種選擇。從方案設計、基因優化、表達條件優化到純化的技術體系，以提高目的蛋白表達水平。

p53基因是迄今發現與人類腫瘤相關性最高的基因，其作為迄今為止發現的與人類腫瘤發生相關性最高的抑癌基因，其研究進展對于腫瘤的發生機制研究和臨床治療具有重要意義。BCL-2家族中的成員是調節細胞凋亡信號通路的重要因子，其中包括能夠促進腫瘤細胞凋亡的Bax、BH3-only和能夠抑制凋亡的BCL-2三個蛋白亞家族。BAX在正常狀態下以單體形式存在，細胞凋亡時轉化為有活性的大分子量復合體。近年來研究表明與細胞增殖和癌變有關的癌基因 bcl-2參與了對細胞凋亡、增殖的調控。p53引起細胞發生凋亡的機制包括結合Bcl-2基因，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達從而誘導細胞調亡，也有研究稱p53的凋亡調解是通過上調Bax和下調Bcl-2從而改變Bcl-xL/Bcl-xS實現的。

1、南蛇騰提取物的藥理研究

藥理研究表明南蛇騰具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗生育、昆蟲拒食及毒殺等活性。從滇南蛇藤種子中提出一種粗油，對大鼠有鎮靜及安定作用。用逆流分溶的方法進一步提純后，得到Mal-Ⅲ，仍具有安定作用，但200毫克／公斤使貓流涎、腹瀉、震顫；

再進一步提純后得Mal-ⅢA，對貓仍有安定作用，而無副作用；如于沸水浴中加熱4小時后，安定作用消失。將Mal-ⅢA混懸于吐溫80后，注射于狗、貓、猴，小鼠、大鼠腹腔，均有明顯的安定作用，并能增強環己巴比妥的作用，對小鼠具有降溫效力。本劑小劑量（70毫克／公斤）能對抗五甲烯四氮唑對大鼠的致死作用，但加大劑量則增強其毒性。Mal-ⅢA尚能減少動物自發活動，對麻醉貓，并有降壓作用，對大鼠有中等度利尿作用，對離體腸管有拮抗致痙劑作用。

滇南蛇藤種子的油亦具有解痙性質，如對大鼠子宮等，并使血管收縮，但無抗菌活性；種子中提出的苦味樹脂，有降壓作用，小量使蛙心率減慢，大量使心臟停止于舒張期。

南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物具有抗腫瘤作用，在發揮抗腫瘤作用的同時，對肝臟及免疫系統無明顯毒副作用，并可通過提高體內抗氧化酶活性和自由基清除劑水平，保護機體免受氧自由基的攻擊，起到腫瘤防治作用；南蛇藤乙酸乙酯、正丁醇提取物對幽門螺桿菌有一定抑制作用。

細胞實驗表明乙酸乙酯提取物能增加細胞在t-BHP損傷下的存活率，提高細胞SOD、GSH-Px的活力，降低MDA含量。RT-PCR實驗表明南蛇藤乙酸乙酯提取物能顯著下調衰老基因P16、P21和P53的表達。

2、南蛇藤提取物對人胃癌裸鼠移植瘤生長及凋亡相關蛋白表達的研究

建立人胃癌裸鼠移植瘤模型，隨機分為模型組，COE低、中、高劑量(10、20、40 mg/kg)組和希羅達(267 mg/kg)組，每組7只，各組ig給藥，給藥3周后檢測裸鼠體質量、腫瘤體積、瘤質量等，繪制腫瘤生長曲線，并計算抑瘤率。應用TUNEL法檢測COE處理后各組移植瘤組織中的細胞凋亡情況；免疫組織化學法和Western blotting技術分別檢測各組移植瘤組織和SGC-7901腫瘤細胞中p53、Bcl-2、Bax蛋白的表達。

結果發現COE能夠較好地抑制胃癌裸鼠移植瘤的生長，能明顯縮小腫瘤體積，且呈劑量依賴性。COE低、中、高劑量組的抑瘤率分別為33.3%、46.8%、57.7%。TUNEL法顯示COE處理后腫瘤細胞凋亡較模型組明顯增多。免疫組化結果顯示COE處理后移植瘤組織中p53和Bax蛋白表達有升高的趨勢，而Bcl-2蛋白表達有降低的趨勢。其中與模型組相比，COE高劑量組中p53和Bax蛋白表達顯著升高(P<0.001)，而Bcl-2蛋白表達顯著降低(P<0.001)。Western blotting結果顯示與免疫組化有大致相同的變化趨勢。因此COE對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠移植瘤具有明顯的抑制作用，其機制可能與上調p53和Bax的表達，下調Bcl-2的表達，誘導胃癌細胞凋亡有關。