固相萃取高效液相色譜法測定水中痕量藻類毒素

實驗概要

本實驗建立了固相萃取(SPE)高效液相色譜(HVLC)檢測水環境中痕量藻毒素的分析方法，并用于實際樣品分析。該法具有操作簡便，靈敏度高的特點，適合水質監測部門應用。同時，與酶聯免疫法相比，在定性和定量上更加可靠，可推廣進行水中藻毒素含量的檢測。

主要試劑

徽囊藻毒素標樣為MC-LR，MC-RR(Sigma公司)，三氟乙酸(化學純)，甲醇(色譜純)，雙蒸水。

主要設備

LC-890A型高效液相色譜儀，配有S-3702型紫外可見光檢測器，LC-850型柱室恒溫箱；色譜數據工作站，Hypersil BDS C18分析色譜柱(4．6×250mm，5／um)，C18保護預柱，C18固相萃取柱(100 g／L)。

RE-52A型旋轉蒸發器，250mL杯式濾器，0．45um混合纖維素酯微孔濾膜和0．45um針頭過濾器。

實驗步驟

1. 色譜分析條件

流動相為含0．1％-氟乙酸的水溶液：甲醇=30：70(V／V)，流速1 ml/min，進樣量l0 uL，色譜柱恒溫箱設為25℃，紫外檢測波長為238nm，實驗依據保留時間定性，外標法定量。

2. 儲備液和標準液配制

分別將0．500mg微囊藻標準品溶于2．00ml甲醇中，作為儲備液。用前再以甲醇稀釋配制成標準系列。

3. 樣品制備

   1) 取水樣500 mL，于杯式濾器中經0．45um濾膜減壓過濾。濾液中加10ml甲醇調節后過C18反相固相萃取柱。C18反相固相萃取柱用前以10 mL甲醇活化并用加mL雙蒸水調整。

   2) 將水樣以5-10mL／min的流速流過固相萃取柱進行富集濃縮。

   3) 裝樣完畢后，用5％甲醇水溶液lOml淋洗以凈化樣品，待固相萃取柱吹干后，以4 mL甲醇將微囊藻毒素洗脫并經針頭過濾器過濾后收集于濃縮瓶內。洗脫液用旋轉蒸發器蒸發至0．2-0．5mL，氮氣吹干后于-20℃冷凍保存。分析前用甲醇溶解，定容為0．20ml。