基因治療（二）

  （二)目的基因組織專一性表達的調節

　　許多組織專一性表達的調節片段已研究清楚，把這些片段與目的基因一起重組入逆轉錄病毒可用于基因的靶向表達。

　　1、肝專一性表達

　　肝專一性表達研究較多的是磷酸烯醇式酮酸羧激酶的啟動子。McGrane 等用了轉基因動物技術使該啟動子表達外源基因，證明該啟動子專一性地在肝和腎等中表達；Hatzoglau等用PEPCK啟動子與neo基因或牛生長因子重組入逆轉錄病毒載體。克隆后經腹腔注射入子宮感染鼠胎肝或注入門靜脈并切除部分肝，證實前病毒可整合肝細胞基因組，并持續表達了八個月之久，而且牛生長因子表達量受食物刺激信號的調節。

　　另一個肝專一性表達的片段是A-胰蛋白酶基因的順式作用因子。Simon等的研究表明，α-AT基因上游是決定肝專一性表達的片段，（-137～37)為最短的肝專一性表達的片段。Peng等用α-AT的（-730-30)片段與SV40啟動子融合驅動人苯丙氨酸羥化酶基因，使其在肝臟專一性表達，為苯丙酮尿癥基因治療奠定了基礎。

　　α-FP為肝癌細胞特有的高效表達產物，Watanabe等發現其上游調控區（-3700～3300)決定了α-FP在肝癌中的專一性表達。Huber等將片段與你腺嘧啶激酶基因融合，克隆入逆轉錄病毒后轉染肝細胞，然后給予無毒性原藥-阿拉伯糖核苷，只有肝癌細胞才專一性地合成TK，批ara-MF轉化成細胞毒性ara-ATP，造成肝癌細胞的死亡，而其它感染了α-EF-TK的細胞不受影響。

　　2、肌肉專一性表達

　　肌肉中高效表達的是肌苷激酶的調控片段。Johnson等發現MCK調控區有兩個增強子：一個位于（-1256～1049)，決定肌肉和心肌專一性表達，另一個位于第一內含子（738～1599)，只決定在心肌的高效專一性表達。Cox等用這兩個增強子使Dystrophin在肌肉的表達量增強50倍，完全糾正了mdr鼠肌肉病理變化，而且無付作用，最近，Yao等用2分MCK增強子（-1350～1048)使人凝血因子IX在肌母細胞中得到高效表達。

　　3、乳腺專一性表達

　　在乳腺中專一性表達的基因有β酪蛋白，乳清酸蛋白，鼠乳腺腫瘤病毒，三都調控區中的負調控片段決定他們僅在乳腺組織中表達。

　　4、黑色素瘤專一性表達

　　黑色素瘤特異性表達酪氨酸和酪氨酸相關蛋白。決定酪氨酸專一性表達的片段是在該基因上游（-270～1)，決定TRP-1專一性表達的區域為（-640～165)，Hart等用上述調控區與Gal報告基因融合，在人與鼠的黑色素瘤細胞中均檢測到其表達。

　　5、膠質瘤專一性表達

　　目前已知鞘磷酸堿性蛋白基因上游（-1300～1)片段決定其在膠質瘤細胞中的專一性表達，Miyao等用該片段與HTK基因融合，轉染膠質瘤細胞，在1μMganciclovir培養液中，90%膠質瘤細胞死亡，而對照組生長不受影響。

　　6、肺癌專一性表達

　　人表面活性蛋白A是大多數肺癌表達的物質。Smith 等用SPA-1上游（-2600～178)片段驅動HSV-TK基因，轉化肺癌細胞株H441，給予ganciclovir后，H441大量死亡。