多克隆抗血清的制備2

用 其 他 佐 劑 制 備 多 克 隆 抗 體 的 免 疫 接 種 法

附 加 材 料（其他材料見基本方案）

TiterMaxttR-I (CytRx; 4°C 下儲存少于 24 個月）或 Ribi 佐 劑 系 統（RAS; RibiImmunoChem; 儲 存 于 2?8°C 但不冷凍）

Iml 塑料吸管

40?45°C 水 浴 ，僅 用 于 RAS 佐劑

la. TiterMax: 用 TiterMax 佐 劑 乳 化 房 水 抗 原（見基本方案，步 驟 1?3)，但在步驟 2中使用〇.5 ml 抗原和一個 0 ?5 ml TiterMax 管形瓶和在步驟 3 中 使 用 Iml 塑料注射器（使 用 TiterMax 佐劑時不要使用玻璃注射器）。此 Im l 抗原-佐劑乳化液能夠免疫 2 0 只小鼠、 1 0 只家兔或 1 只山羊。 4°C 、一 20°C 或一 70°C 下儲存未用的乳狀液。如需要，使用前重新乳化。

lb. Ribi 佐劑系統： 40?45°C 水浴加熱含有 RAS 的 管 形 瓶 5?lOmin。用 一 個 3m l 含有21 G 針頭的注射器直接穿過橡皮塞向瓶中加入含有 2 ml 抗 原 的 PBS 液 。將管形瓶蓋上蓋子，室溫條件下，劇烈振蕩 3 min，制 備 2m l 含 有 2 % 角鯊烯油的佐劑-抗原溶液 ，足夠免疫 1 0 只小鼠、 2 只 家 兔 或 1 只山羊。 4°C 下儲存未使用的乳狀液數月。如需要較少量，向管形瓶中加入 1.0 ml PBS， 4°C 下保存，用時，在 此 PBS 液中以 1: I (V/v 的比例混合抗原。

2.轉移乳狀液至 Iml 注射器中，在注射器上接一個 22 G 的針頭，趕走注射器中的氣泡。

3.固 定 動 物（附 錄 2C)，注射佐劑-抗原乳狀液。

a. 對 于 TiterMax，在家兔兩側大腿肌內注射 40ul 乳狀液 (每只家兔 30?SOUg 抗原）。

b. 對 于 RAS，給家兔多個部位注射含有 50?250 ug 抗 原 的 RAS 1.0 ml: 0.05m l 皮內注射于 6 個部位， 0.3 ml 兩側大腿肌內注射， 0.1 ml 頸部皮下注射。

4.對 動 物 采 血（附 錄 2F) ，制備抗原以增強免疫（見基本方案，步 驟 6、 7)。

5.在 第 4 、 8 和 1 2 周進行增強免疫。在每一次的增強免疫 10?14d 后對動物采血，制備 血 清（見輔助方案），檢測血清，當達到較高的特異性抗原滴度時終止免疫。

a.對 于 TiterMax，可能不是所有抗原都需要增強。如果需要進行再次免疫，第 4 周時可用可溶性抗原代替抗原-佐劑。若 1 〇 ?14d 后滴度仍然很低，立即給予增強劑量的抗原-佐劑。增加抗原的量可能也有幫助。

b. 對 于 RAS，給予抗原-佐劑增強注射，其頻率不要超過每 4 周 1 次 。