大腸桿菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段實驗

實驗方法原理

選用本方法可產生用于放射自顯影的32P末端標記分子量標志物。放射自顯影帶的強度與片段長度無關，標記DNA可穩定數月之久。

實驗材料 DNA

試劑、試劑盒 dNTP

儀器、耗材 水浴鍋

實驗步驟

1.  在20 μl 反應體積中，用可產生5’突出端的限制性內切酶消化0.1~0.4 μg DNA。

2.  加入20 μl Ci所需的［α-32P］標記下dNTP（400~800 Ci/mmol）和1 μl 5 mmol/l 3dNTP混合液。

3.  如需要高比活，可加入80 μCi［α-32P］標記的dNTP，加入1 U klenow 酶，30℃’溫育15 min。

4.  75℃加熱10 min 以終止反應。如果需要，從標記DNA中去除未摻入的前體dNTP。