如何看流式細胞術結果中的圖

FCM數據的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數據的顯示通常有一維直方圖、二維點圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數據還可以做出標準曲線進行定量分 析。Q1：坐標軸的意義？1、 單參數直方圖 每一個細胞單參數的測量數據可以整理成統計分布，以直方圖的方式來顯示。在圖中，橫坐標表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，其單位是道數（channel），可以是線形（line）或者對數（log）。縱坐標一般是相對細胞/粒子數（count）！2、 二維圖 在二維圖的中，橫坐標/縱坐標都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，可以是線形（line）或者對數（log）。雙參數圖可以將樣品細胞群分開，從而方便對感興趣的細胞進行分析。Q2：Gate和 Regin？ 設門是流式細胞分析中一種重要的技術，只有通過最佳的設門方式，才能準確地獲取和分析數據，從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息。 On-line gating(threshold gating)監測/獲取數據 Off-line gating： 分析實驗數據 散射光設門/熒光設門 散射光/熒光聯合設門 多重邏輯門(組合門) 多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1R2) 其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2 Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色? 流式圖中的顏色為區分不同細胞群而人為指定, 與熒光顏色無關!! Q4：流式圖中的陰/陽（N/P）如何劃分? 如何做M1陰性界限？實際上，這個M1的劃分完全是根據陰性(同型)對照來的！如下圖：左圖為同型對照，即：您所檢測的物質在陰性組中的基礎表達量，可以理解為背景、靜息狀態下、基礎水平、未受刺激時等。右圖即陽性組，也就是接受刺激后，功能狀態下、藥物作用后等。 Q5: 這么巧，陰性正好在101劃分？？ 其實, 我們可以人為地將電壓，放大倍數調到相應的大小，使陰性的右邊界在某一個值上，（通常劃在101附近）這樣后期做sample時好看！當然也可以調到102，103次方。 Q6：為什么要進行熒光補償？ 流式細胞分析中經常要用到2種以上的熒光標記抗體進行染色，而目前所使用的多種熒光染料發射譜間有一定重疊。 熒光補償這個術語是指修正熒光滲漏的過程，如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號。