1.溫度影響:一般說來,熒光隨溫度升高而強度減弱,溫度升高1℃,熒光強度下降1~10%不等。測定時,溫度必須保持恒定。
2.PH值影響:PH 值影響物質的熒光,應選擇最佳PH制備樣品。
3.光分解對熒光測定的影響:
熒光物質吸收紫外可見光后,發生光化學反應,導致熒光強度下降。因此,熒光分析儀要采用高靈敏度的檢測器,而不是用增強光源來提高靈敏度。測定時,用較窄的激發光部分的狹縫,以減弱激發光。同時,用較寬的發射狹縫引導熒光。熒光分析應盡量在暗環境中進行。
4.散射光的影響:
主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影響較大。校正辦法:先用短的激發光激發,檢出溶液的拉曼峰,然后進行熒光光譜校正。因為熒光光譜不隨激發光波長的改變而改變,而拉曼光卻隨之改變。
5.高濃度樣品的影響:
1)當激發光照射高濃度樣品時,在激發光入口附近產生熒光,但這些熒光并不能進入熒光檢測器。
2)高濃度的分子之間相互作用而發生活性阻礙現象。
3)熒光的再吸收:即熒光光譜的短波長端和激發光譜的長波長端如果相互重疊,則發生熒光再吸收。
總之,高濃度樣品進行熒光分析時,應進行稀釋。
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