方案27.2用PHA刺激淋巴細胞

添加10%FBS的培養液或自體血清植物血凝素秋水仙酰胺

KCl

試管或普通容器顯微鏡下使用的載玻片

1. 取在方案 27.1 中步驟 7 清洗的細胞，用 HEPES 或 CO₂ 緩沖的 DMEM、CMRL 1066 或添加 10 % 自體血清或 FBS 的 RPMI 1640 培養，細胞密度為 2×10⁶ 個/ml，培養深度為 1.5~2.0 cm。

2. 按 5 μg/ml 終濃度加入 PHA，刺激有絲分裂 24~72 h。

3. 分別在 24、36、48、60 和 72 h 收集細胞，制備涂片或離心制備細胞玻片，以確定最佳培養時間（即最大分裂指數）。

4. 按 0.001 μg/ml 終濃度加人秋水仙酰胺（用 BSS 配制），處理 2 h。有絲分裂高峰的出現比在步驟 3 所觀察到的提前 [ Berger, 1979 ]。

5. 在秋水仙酰胺處理后，將細胞離心。然后，用 0.075 mol/L KCl 混懸細胞，使細胞低滲腫脹，制備染色體（見方案 16. 7 和方案 27. 5)。