雜交瘤細胞的篩選

雜交瘤細胞的篩選 

在細胞融合后，要從上述五種細胞中篩選出雜交瘤細胞，一般使用HAT培養進行篩選，HAT培養基中含有次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）三種成分。細胞的DNA合成有內源性途徑（主要途徑）和外源性途徑（旁路途徑）兩種方式。內源性途徑就是利用谷氨酰胺或單磷酸尿苷酸在二氫葉酸還原酶的催化下來合成DNA；而外源性途徑則是利用次黃嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase, HGPRT）或胸腺嘧啶激酶（thymidine kinase,TK）的催化下來補救合成DNA，HAT培養基中氯基喋呤是二氫葉酸還原酶的抑制劑, 能有效地阻斷DNA合成的內源性途徑。

雜交瘤細胞的篩選 

B淋巴細胞具有HGPRTTK這兩種酶, 因此在內源性途徑被阻斷后仍能利用HAT培養基中的次黃嘌呤和胸腺嘧啶來合成DNA，可在HAT培養基中存活, 但B淋巴細胞是正常細胞, 故不能長期存活。雜交瘤技術中所使用和SP2/0-Ag14骨髓瘤細胞為HGPRT-的TK-缺陷型, 缺乏HGPRT酶和TK酶在內源性途徑被阻斷后不能進行DNA的外源性合成，故不能在HAT培養基中存活。雜交瘤細胞由于繼承了B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的雙重特性，能夠合成HGPRT酶和TK酶，故在HAT養基中能長期存活。因此將融合后的混合細胞在HAT培養基中培養兩周后，只有雜交瘤細胞能存活下來，成為制造單克隆抗體的細胞源。