實驗概要
本實驗介紹了畢赤酵母電轉化方法。該方法無需產生去壁細胞，是產生畢赤酵母重組子的簡便方法。與去壁細胞效率相似。
實驗步驟
1. 細胞準備：
1) 在含5mlYPD 的50ml 離心管中，培養畢赤酵母，30 度過夜。
2) 取0.1-0.5ml 過夜培養物，接種含500ml 新鮮培養基的2L 搖瓶，過夜生長至OD600＝1.3-1.5。
3) 在4 度，1500g離心5min收集細胞，用500ml預冷的滅菌水懸浮細胞。
4) 如上離心，用250 ml預冷的滅菌水懸浮細胞。
5) 如上離心，用20ml預冷的1M山梨醇懸浮細胞。
6) 如上離心，用1 ml 預冷的1M山梨醇懸浮細胞，至終體積約1.5ml。
注意：可凍存80ul 等量的電感受態細胞，但轉化效率會下降很多。
2. 轉化：
1) 取80ul上述細胞與5-20ug線性化DNA(溶于5-10ulTE)混合，轉入預冷的0.2cm 電轉杯中。
2) 在冰上放置5min。
3) 根據所使用裝置推薦的釀酒酵母參數進行電擊。
4) 立即加入1ml 預冷的1M山梨醇至杯中，將內容物轉移至滅菌離心管中。
5) 分成200-600ul等份，涂于MD 或RDB平板上。
6) 在30 度孵育平板至克隆產生，篩選Mut /Muts表型。