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實驗概要本實驗介紹了畢赤酵母電轉化方法。該方法無需產生去壁細胞，是產生畢赤酵母重組子的簡便方法。與去壁細胞效率相似。實驗步驟1. 細胞準備： 1) 在含5mlYPD 的50ml 離心管中，培養畢赤酵母，30 度過夜。 2) 取0.1-0.5ml 過夜培養物，接種含500ml 新鮮培養基的2L 搖瓶，過夜生長至OD600＝1.3-1.5。 3) 在4 度，1500g離心5min收集細胞，用500ml預冷的滅菌水懸浮細胞。 4) 如上離心，用250 ml預冷的滅菌水懸浮細胞。 5) 如上離心，用20ml預冷的1M山梨醇懸浮細胞。 6) 如上離心，用1 ml 預冷的1M山梨醇懸浮細胞，至終體積約1.5ml。注意：可凍存80ul 等量的電感受態細胞，但轉化效率會下降很多。2. 轉化： ......閱讀全文
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液 試劑、試劑盒 Giemsa 染液
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒 Giemsa 染液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉載體 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿基因脈沖器 II電穿孔設備與電轉化池Sorvall H1000B 轉子或類似設備實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需
電穿孔可以有效地轉染磷酸鈣-DNA 沉淀物等其他方法轉染效果不好的細胞系。但是，與其他轉染方法一樣，未使用過的細胞系進行電穿孔轉染的實驗條件要經過優化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒Giem
M13 噬菌體衣殼蛋白改造在改良噬菌體展示技術中的應用實驗實驗材料 羧芐青霉素氯霉素大腸桿菌 CJ236試劑、試劑盒 生理磷酸緩沖液超純甘油PBS-T 緩沖液PBS-T-BSA 緩沖液儀器、耗材 2YT 培養基SOC 培養基實驗步驟 下述方法描述了 P8 庫的設計（見 12.3.1)、構建（見
本章描述了改進融合蛋白在 M13 噬菌體顆粒表面展示水平的一個方法。向 M13 衣殼錨定蛋白引入突變后，蛋白質展示水平約能增加兩個數量級。本實驗來源「現代蛋白質工程實驗指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒編著。實驗材料羧芐青霉素氯霉素大腸桿菌 CJ236試劑、試劑盒生理磷酸緩沖液超純甘油PBS-
實驗材料 宿主細胞 質粒或λ噬菌體表達載體 包裝提取物 電轉化感受態大腸桿菌
實驗材料 宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體包裝提取物電轉化感受態大腸桿菌試劑、試劑盒 限制性內切核酸酶緩沖液限制性內切核酸酶通過 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文庫含適當抗生素的 Terrific 球脂平板含適當抗生素的 Terrific 肉湯培養基儀器、耗材 cDNA 合成試劑盒實驗步驟
類似方案 1、方案 2 描述了在真核表達載體上進行 cDNA 文庫構建與篩選的方法, 流程分為以下兩個階段：1. 在真核表達載體上構建 cDNA 文庫；2. 在真核表達載體上構建的 cDNA 文庫的篩選。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：黃培堂。實驗材料宿主細胞質粒或λ噬菌體表達載體
常規的轉染包括脂質體，電轉化和病毒法。普通的293、Hela等細胞系，脂質體轉染也能達到70-80%。而對于其他一些極難轉染的細胞，如原代神經元，原代神經干細胞，免疫細胞等來說，脂質體轉染不僅轉化效率很低（約10%），而且細胞死亡率極高。因此有些研究人員不得不轉用更加昂貴而且毒性更大的病毒包被法。病
在低熔點瓊脂糖中連接質粒和目的DNA實驗 實驗方法原理 質粒克隆操作最費時間的步驟是用電泳的方法對預期大小的外源 DNA 片段和質粒 DNA 片段進
質粒克隆操作最費時間的步驟是用電泳的方法對預期大小的外源 DNA 片段和質粒 DNA 片段進行純化，可以用于將質粒和外源 DNA 的連接在低熔點球脂糖存在的條件下完成實驗方法原理質粒克隆操作最費時間的步驟是用電泳的方法對預期大小的外源 DNA 片段和質粒 DNA 片段進行純化，在以下的方案中（取自S
實驗方法原理高壓電轉化簡單，快捷可靠，而且是目前效率最高的質粒DNA轉化大腸桿菌方法。不過該方法需要電轉化裝置。實驗材料菌落試劑、試劑盒LB甘油SOC儀器、耗材平板離心瓶聚丙烯管電阻器電轉化池實驗步驟1. 接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37°C溫和振搖培養5 h或過夜。2. &n
實驗概要本實驗通過電轉化連接物，構建了抗體文庫。主要試劑1. SOC培養基(將20g細菌培養用胰蛋白胨、5g酵母提取物及0.5g NaCl溶于950ml水中。加入10m1 250mmol/L KCl，5mol/L NaOH調整pH至7.0并加入去離子水至IL。高壓滅菌。手感變涼后，再加入5m
生化方法l 磷酸鈣介導的質粒DNA轉染真核細胞1. 轉染前24 h，通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于
借助電轉方法將Cas9蛋白質/sgRNA導入小鼠原核受精卵生成非嵌合體突變體胚胎基因編輯解析：借助電轉方法將Cas9蛋白質/sgRNA導入小鼠原核受精卵生成非嵌合體突變體基因編輯技術指能夠讓人類對目標基因進行“編輯”，實現對特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技術自問世以來，就有著
三．主要試驗環節的操作3.1 酵母菌株的分離純化接種GS115于5ml YPD液體培養基，30℃，200rpm振蕩過夜，涂布 YPD平板，30℃培養48 小時，用 YNB基本培養基和含His的補充培養基作點種分離純化，挑選在補充培養基生上生長而在基本培養基上不生長的單菌落劃YPD平板，4℃保存。3.
1、確定目標對象：也就是你所有轉的目的物是什么東西？ 細胞系和細胞類型 細胞類型包括人類、哺乳動物、細菌、植物、藻類、霉菌、寄生蟲等 細胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyce
在之前的文章中，我們多次講到了 Maxwell 方程組，有從純數學角度的闡述，也有其產生背景的介紹。那么 今天我們再次介紹一下 Maxwell 方程組。 麥克斯韋方程組的出現，預言了電磁波的存在，也促使了一批批的科學家去探尋電磁波的奧秘，隨著赫茲的電火花，開啟了無線的大門
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBSOC儀器、耗材電轉化儀離心機分光光度計實驗步驟1. 接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37℃溫和振搖培養5 h 或過夜。2. 將2.5 ml 培養物加人到盛有500 ml LB培養液的2 L 燒瓶中，37℃搖勻振蕩培養至OD600為0.
2．檢測：（PCR方法）取適量PCR薄壁管，置于冰上，按以下體系依次加入：各試劑均加好后，離心機上甩一下，使之沉底，置于PCR儀上待 PCR反應進入4℃后，取下PCR薄壁管，取7ulPCR產物加入3ul溴芬蘭跑電泳，同時上1Kb DNA ladder半小時后照相，觀察膠圖：insert、vector
1實驗原理DNA重組分子在體外構建完成后，必須導入特定的受體細胞，使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀，這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化。對于不同的受體細胞，往往采取不同的轉化戰略。1.1 DNA重組分子的常用轉化方法1.1.1 Ca 2 誘導轉化1970年Mandel和H
實驗概要本實驗構建了pⅧ噬菌粒庫，主要包括：載體的準備，插入片段的準備，連接插入片段與BstⅪ消化的p8V5載體及擴增與儲存。主要試劑p8V5噬菌粒載體(AHymaxlnc)LB氨芐青霉素培養基(1％蛋白胨，0，5％酵母提取物， 0.5％ NaCl，100ug/m1氨芐青霉素)BstⅪ限制性內切酶(
近期，中國科學院合肥物質科學研究院固體物理研究所在生物質電催化轉化方面取得新進展，該工作不僅展示了生物質平臺分子——糠醛的綠色電催化轉化升級過程，還對電催化轉移加氫機理進行了深入探究。相關研究成果發表在期刊Applied Catalysis B: Environmental（doi.org/10
近日，中國科學院低碳轉化科學與工程重點實驗室暨上海高等研究院-上海科技大學低碳能源聯合實驗室在電催化二氧化碳還原轉化生成甲酸和乙醇方面均取得重要進展，相關結果分別發表于國際期刊《德國應用化學》 (Angew. Chem. Int. Ed. 2017, doi: 10.1002/anie.2017
電轉化流程適用于（1）轉基因（2）基因介導（3）基因修復。實驗方法原理胞電轉染（電轉），也叫細胞電穿孔 (electroporation)，是把外源大分子物質DNA、RNA、siRNA、蛋白質等以及一些小分子導入細胞膜內部的重要方法。 在瞬間強大電場的作用下，溶液中細胞的細胞膜具有了一定的
3.3 文庫的克隆和回收( 1 ) 插入片段和載體的理想比例是（2 : 1 ) ~（3 : 1 )。我們將用于連接的 DNA 濃度限制在 10 ng/μl，使用 1 mmol/L 的 ATP，16°C 連接過夜（見注 8 )。( 2 ) 連接反應體系于 65°C 處理，使酶失活，用氯仿抽提，然后用乙
實驗方法原理 質粒克隆操作最費時間的步驟是用電泳的方法對預期大小的外源 DNA 片段和質粒 DNA 片段進行純化，在以下的方案中（取自Struhl 1985)，質粒和外源 DNA 的連接可在低熔點球脂糖存在的條件下完成。實驗材料 限制性內切核酸酶外源 DNA 片段質粒 DNA試劑
Raf 蛋白 Ras 結合結構域的簡并進化庫合成以及利用片段互補法快速篩選二氫葉酸還原酶的快速折疊且穩定的克隆
實驗材料寡核苷酸引物Tag 聚合酶BL21 電轉感受態細胞試劑、試劑盒氨芐青霉素卡那霉素儀器、耗材瓊脂糖凝膠實驗步驟3.1 概論3.1.1 PCA 對空間排列的要求PCA 片段的三維朝向對于 PCA 報告蛋白是否能正確折疊至關重要，它取決于形成復合體的目的蛋白 N 端或 C 端的朝向（圖 15.1
由于傳感器應用十分廣泛，類型多種多樣，在各行各業都有應用。因此，在這里主要介紹用于振動測試的振動傳感器的選型。按測量振動參量分類可分為三大類：位移傳感器、速度傳感器和加速度傳感器（也稱為加速度計）。一般來說，位移傳感器適用于低頻測量，速度傳感器適用于中頻測量，加速度傳感器適用于中高頻測量。由