復方蘆于片屬于維生素類藥。主要用于高血壓病的輔助治療，其主要成分為蘆丁和維生素C，蘆 丁是維生素P的一種，具有維持血管抵抗力、降低其通透性、減少脆性及抗炎、抗病毒等作用;維生素C為人體必需的營養成分，臨床用于壞血病的預防及治療，可增加人體的抵抗力[1]，蘆丁[2，3]和維C[4，5]的測定方法有很多，其中液相色譜法[6]較多被應用，陳剛等[7]用毛細管電泳電化學柱端檢測法同時測定了復方蘆丁片中的蘆丁和維 C，但電化學檢測法存在電極制備比較困難，操作繁瑣的缺點，本研究采用紫外檢測法同時測定了復方蘆丁片中的蘆丁和維C。
1 實驗部分
1.1 儀器和試劑
ACS-2000毛細管電泳儀(中國科學院研究生院應用化學研究所);8823-B紫外檢測器(北京新技術研究所)，檢測波長254nm，未涂層彈性石英毛細管柱(50μm i.d. 總長50cm，有效長度40m(河北永年光導纖維廠)，PHS-3型酸度計(上海雷磁儀器廠)。
蘆丁(baicalm)(中國藥品生物制品檢定所);復方蘆丁片(北京市燕京制藥廠，批號981104);其它試劑均為分析純，水為二次重蒸水。
1.2 標準溶液的制備
準確稱取復方蘆丁和維生素C，分別用適量乙醇及水溶液，使濃度分別為1.0mg/Ml 和10.0mg/mL, 以0.45nm濾膜過濾后備用。
1.3 樣品溶液的制備
將多片復方蘆丁片研成細粉，準確稱取0.5g的粉末于50mL 溶量瓶中，加30mmol/L 硼砂-乙醇(體積比1：1)混合溶液20Ml， 于50C水浴中預熱15min，超聲助深2min后定容，經普通濾紙過濾，即得復方蘆丁片樣品溶液，以0.45nm濾膜過濾后備用。
1.4 實驗條件的選擇
以30mmol/L 硼砂緩沖溶液(硼酸調至Ph7.50)為電泳介質，未涂層彈性石英毛細管(50nm i. d，總長50cm，用于分離的有效長度為40cm)。所有溶液使用前均用0.45μm濾膜過濾，每次實驗后依次以0.01 mol/L NaOH溶液、蒸餾水及電泳緩沖溶液清洗毛細管10min，然后進行分離測定，實驗過程中采用電動進樣，采樣時間5s，采樣電壓10kV，分離電壓 10kV，檢測波長254mm，測定峰電流的高度，所有實驗均在室溫下進行。
2 結果與討論
2.1 緩沖液pH值的影響
電泳液的pH值對分離效果有著很大的影響。在實驗過程中發現，隨著緩沖溶液pH值的增大，蘆丁及維C的遷移時間均有所減小，分離度變差，故選擇 pH7.50。
2.2 分離電壓及緩沖溶液濃度的影響
上述實驗條件下分別考察了分離電壓(6~20Kv)及緩沖溶液濃度(10~100mmol/L)的影響，結果發現，各組分的遷移率隨分離電壓的降低而減小，遷移時間增大，分離度提高但譜帶展寬且峰高降低，隨著高壓增高，基線噪音也增大，分離度變差，隨緩沖溶液濃度的增加，遷移時間增大，但電流增大會導致毛細管發熱，降低分離度，故實驗過程中選用10kV作為分離電壓，30mmol/L的Na2B4O7-H3BO3(pH7.50)為緩沖溶液，在此條件下，蘆丁和維生素C在13min內得到了良好的分離。
2.3 進樣時間的選擇
分離電壓10kV，選擇進樣時間為2，4，6，8，10和12s，測定蘆丁與維C的峰高與進樣時間的關系，發現8s后峰高增加不明顯，但導致峰展寬和拖尾，故選擇進樣時間為5s。
2.4 工作曲線及檢測限
在上述實驗條件下，對一系列蘆丁和維C的標準混合樣品進行分析測定，測定其峰高與濃度的關系，結果如表1所示。
表1 蘆丁和維C的回歸方程及檢測限
Tab.1 Regression equations and detection limits for rutin and vitamin C
樣品 回歸方程 相關 線性范圍 檢測限
y=a+bx 系數 (mg/mL) (mg/mL)
蘆 丁 y=21.52x+0.21 0.9995 0.5~0.005 0.002
維生素C y=5.475x-0.49 0.9990 5.0~0.05 0.01
*y和x分別表示峰高(nA)和被測物濃度(mg/mL);* *檢測限按3倍噪聲計算
圖1 樣品的毛細管電泳圖
Fig. 1 Electrophograms of sample solution
1—乙醇; 2—蘆丁;3—維C
2.5 精密度實驗
濃度為0.5mg/mL的蘆 丁和維C對照品溶液各平等進樣6次，測得蘆 丁峰高的RSD為1.9%，遷移時間的RSD為2.8%;維C峰高的RSD為2.8%，遷移時間的RSD為2.6%。
2.6 樣品測定及回收率
精密吸取6份樣品溶液，每份2.0mL，以緩沖溶液定容于10mL容量瓶中后，依上述實驗條件分別測定蘆丁和維C的含量見圖1;精密吸取6份樣品溶液，每份2.0mL，分別加入蘆丁和維C對照品0.2mg和0.5mg，以緩沖溶液定容于10mL容量瓶中后，依上述實驗條件進行加標回收實驗，所測結果列于表2。
表2 樣品測定結果及回收率(n=6)
Tab.2 Determination results of sample
樣品 指示值 測定值 回收率
(mg/片) (mg/片) (%)
蘆丁 20 20.61 99.61
維C 50 51.87 100.6