流式細胞術原理

流式細胞術公開課

會形成鞘液流（鞘液是為了保證細胞在中間形成單個排列的細胞流，因為要保證激光覆蓋整個樣本中心流）在外周，樣本流在中央的層流狀態，使得樣本僅在軸心

激光照射到樣本流上，激光60um寬，20um高（寬高有限，只有樣本流剛好在中間才能保證激光能覆蓋樣本流細胞）

樣本流中的細胞表面的熒光抗體受到激光的照射以后，會被激發出熒光；

有兩個鏡頭接受熒光信號，
一個是forward scatter-FSC檢測器（前向散射光），另一個是side scatter-SSC側向軸檢測器/熒光信號檢測器（與激光90度）

收集到的光信號就被光纖傳導到光分離系統中去了，

光信號手機系統的內圈是長通濾片

中圈和外圈分別是帶通濾片和PMT（啥？）

剛才細胞經過激光照射會有四個重疊的光譜，x軸是波長，y軸是強度

第一步，通過長通濾片，光信號被切割

第二步，經過帶通濾片把特定波長的波過濾過來，不符合波長條件的波被反射

第三步，經過過濾的波，經過PMT轉變成電信號，

PMT元件是電信號檢測分析系統，

左邊是光電轉換膜，上下兩邊有不同的小電極，

側邊有電子檢測器，

光信號轉換成電信號的過程：
光子打到左邊的光電轉換膜上----> 膜上就會蹦出一個電子，這樣就初步實現了光信號轉變成電信號 ----> 電信號經過不同的電極就會反彈 ----> 電子經過反彈，電信號實現級聯放大作用(通過調整電壓可以調整最終的電信號大小) -----> 檢測器上就會形成一個電脈沖

表示電脈沖有三個參數：
峰寬+高度+峰下面積A；
常規的一般用峰下面積A來表示

下面是經過電信號轉換的信號強度值，反映了每個熒光信號的強度；
每一行就是一個細胞，

每一行代表一個細胞，每一列的數值784～10229代表每個特定的PMT的熒光信號強度值；

兩個PMT作為橫縱坐標，可以根據熒光強度判定這兩種熒光抗體結合細胞的比例；

一個細胞在軸上就是一個點，每一個點就代表一個細胞的位置，橫縱坐標分別代表兩個通道PMT的強度（選取的兩個PMT）；
從下圖可以看到黑乎乎的一團代表一種細胞，但具體的數字并不知道，為了彌補這個缺點呢，就出現了密度圖

細胞越多用不同的顏色（偽色）表示，可以看到紅色中心的細胞最多，外周細胞少

把密度相等的點畫成一條線

橫軸代表熒光信號強度，縱軸代表細胞數量