流感病毒RNA聚合酶的分離與純化

[摘要] 　目的　建立分離、純化流感病毒RNA 聚合酶PB1、PB2 和PA 3P 蛋白的有效方法,為進一步研究3P 蛋白的結構和功能奠定基礎。方法　用甘油、CsCl1 及CsTFA 不同介質的密度梯度超速離心法進行分離,用SDS - PAGE 電泳及Western blot 法檢測3P 蛋白,用尿素變性PAGE 檢測vRNA。結果　用甘油密度梯度離心,可從病毒粒子中分離由NP、3P 和RNA 組成的RNP。將純化的RNP 用CsCl 和甘油雙組分不連續密度梯度離心,可形成NP 和3P - RNA兩部分,使NP 與3P - RNA 分離。進一步將3P - RNA 在CsTFA - 甘油雙組分不連續密度梯度介質中進行超速離心,可有效地將3P 與RNA 分離,獲得較純的3P 蛋白。3P 位于離心管的上半部分,而RNA 則位于離心管的近底端部分。結論　用甘油、CsCl - 甘油和CsTFA - 甘油分步超離心法可有效地從流感病毒粒子中純化出高純度的流感病毒RNA 聚合酶。