牛腸激酶基因工程菌的構建、高密度發酵、純化及活性鑒定

摘　要　腸激酶( enterokinase, EK)是一種專一識別DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽鍵的絲氨酸蛋白水解酶. 根據GenBank序列進行人工合成牛腸激酶輕鏈基因cDNA,測序正確后將其插入甲醇酵母分泌型載體pP ICZαA,得到重組質粒pP ICZαA /EKL ,重組載體經線性化后轉化Pichia pastoris SMD 1168H,篩選得到重組牛腸激酶輕鏈工程菌. 分別對重組酵母工程菌進行高密度發酵、rEKL ( recombinant enterokinase light chain, rEKL ) 純化、N端序列測定、生物學活性鑒定等研究工作. 結果表明,發酵上清中rEKL含量高,純化的rEKL專一性強、無其他雜酶活性、N端15個氨基酸序列與文獻報道一致.