我所知道的酶切的目的大致分為兩大類:載體的檢測和southern預備實驗。
你做的如果是常規的PCR檢測,一般不需要酶切后再電泳,只是檢測一下你的目的基因是否成功進入你的受體材料,酶切后反而看不出來了。
酶切的依據是你自己的載體圖中酶切位點的位置與類別,根據不同的酶切位點選擇不同種類的酶。酶切位點一般設置在你插入的目的基因的兩側,如此一來,經過簡單的酶切,就可以將你所需要的目的條帶完整的切下來,再經過瓊脂糖凝膠電泳將兩者分離。在此說一下凝膠電泳的原理,在瓊脂糖凝膠的膠微粒之間,存在著能夠容許DNA通過的間隙,通過的速率取決于你的DNA的分子量,分子量越大遷移率越慢,反之亦然。
舉個例子,你的載體或基因組是10bp,你的目的條帶是3bp,對你的材料進行酶切后,一般會出現三條清晰的條帶,高度由上至下依次為(越高分子量越大):
1.酶切不完全殘留的完整基因組條帶10bp
2.酶切后剩余部分的載體,大約7bp(10bp-3bp)
3.你的目的基因,3bp(10bp-7bp)
不知您明白了沒有,如果是PCR的話,一般不需要酶切!(還是同其他人說的一樣,要先明確你電泳的目的是什么,然后再看到底需不需要酶切。)
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