用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片DNA提取方法

實驗步驟	1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。 2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。 3. 其間用指輕彈離心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μl 蛋白酶 K，直至無沉淀已澄清為止。 4. 滅活蛋白酶 K 裂解液中含有蛋白酶 K，需放入沸水中 10 min 以滅活蛋白酶 K。 5. 沉淀蛋白質按裂解液量的 1/3 加入蛋白質沉淀液（飽和乙酸鈉）并混勻，14500r/mm 離心 15 min。此時，蛋白質沉于管底，DNA 溶解于上清液中。 6. 析出 DNA 取上清液并加入等量冷異丙醇，充分混勻，新鮮標本此時可見 DNA 絲纏繞成團析出。若新鮮標本童太少或固定組織因 DNA 片段較小，無法用肉眼見到 DNA 成團析出，需 14500 r/min 再離心 10 min，一般 DNA 可見于管底。 7. 洗滌溶解 DNA 倒去上清液，加入適量的 75％冷乙醇，以洗掉殘存的異丙醇和無機鹽等物質，反復洗 2 遍。將管底含有 DNA 的離心管倒扣在清潔紙上，以揮發掉殘留的乙醇和水。約 30 min 后，在 DNA 尚不太干時加入適量 TE 溶解 DNA。

實驗步驟

1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。

2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。

3. 其間用指輕彈離心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μl 蛋白酶 K，直至無沉淀已澄清為止。

4. 滅活蛋白酶 K 裂解液中含有蛋白酶 K，需放入沸水中 10 min 以滅活蛋白酶 K。

5. 沉淀蛋白質按裂解液量的 1/3 加入蛋白質沉淀液（飽和乙酸鈉）并混勻，14500r/mm 離心 15 min。此時，蛋白質沉于管底，DNA 溶解于上清液中。

6. 析出 DNA 取上清液并加入等量冷異丙醇，充分混勻，新鮮標本此時可見 DNA 絲纏繞成團析出。若新鮮標本童太少或固定組織因 DNA 片段較小，無法用肉眼見到 DNA 成團析出，需 14500 r/min 再離心 10 min，一般 DNA 可見于管底。

7. 洗滌溶解 DNA 倒去上清液，加入適量的 75％冷乙醇，以洗掉殘存的異丙醇和無機鹽等物質，反復洗 2 遍。將管底含有 DNA 的離心管倒扣在清潔紙上，以揮發掉殘留的乙醇和水。約 30 min 后，在 DNA 尚不太干時加入適量 TE 溶解 DNA。

實驗室