真核細胞培養時支原體污染表現以及解決方式

　支原體是一種特殊的微生物，在哺乳動物（包括人類）、爬行動物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡單的可自我復制的原核生物，大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb，其自身生物合成能力有限，因此大部分營養物質都要依賴于宿主。

　　在真核細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染，估計細胞培養的同學就開始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后，如果不進行有效徹底的支原體清除，該實驗的細胞培養很難進行下去，細胞傳代3代以后狀態就急劇下滑，無法進行正常實驗，有的實驗室甚至只能指望換細胞間。

　　真核細胞培養時支原體污染表現

　　細胞形態改變，一般是有梭形變成圓形，不再貼壁生長，漂浮

　　光鏡下，可以看到細胞膜上吸附很多圓點，40*16倍下約有0.1mm，分布多集中于細胞核周圍和細胞邊緣，中間部位較少

　　消化時可以看到圓點從細胞膜上游離出來，很多，還會動

　　細胞培養液變堿，有大量小黑點游離

　　解決方法

　　①添加抗支原體劑量的pbs或者其他平衡鹽液進行潤洗，然后消化

　　②常規離心，用添加抗支原體（沙星類較為有效）的完全培養液重懸，植入新的培養瓶

　　③培養并且密切觀察（抗支原體推薦使用的濃度及時間如下）

　　  恩諾沙星25μ/ml，治療時間一周；

　　  環丙沙星10μ/ml，治療時間兩周；

　　  司氟沙星10μ/ml，治療時間一周；

　　治療時間滿后撤藥換用普通雙抗培養基或者無抗培養基，另外特別說明因為以上藥物均抗G+-，所以添加的時候不需要再添加常規雙抗。