神經干細胞的培育流程！！

一、  神經干細胞的定向誘導分解

將一部分次代神經球機械別離制成單細胞懸液后別離參與條件培育液和有血清培育基(含10％胎牛血清的DMEM/F12)中對照貼壁培育，7d后均行ChAT免疫細胞化學染色。

二、BrdU符號

將BrdU溶于無血清培育基，過濾除菌后參與神經球構成后再次機械別離克隆制作的單細胞懸液中(BrdU終濃度為5μmol/L)，培育7d待新的神經球構成后，將神經球轉移到預先涂布有多聚賴氨酸的培育板中，貼壁2h行BrdU免疫細胞化學染色。

三、  神經干細胞的誘導分解

選取部分上述傳代后構成的次代神經球培育于預先涂布有多聚賴氨酸的24孔培育板中，并參與有血清培育基(含10％胎牛血清的DMEM/F12)，一部分神經球于貼壁2h后行Nestin免疫細胞化學染色，另一部分神經球繼續培育，調查其生長分解情況。另將一部分次代神經球機械別離制成單細胞懸液后參與有血清培育基貼壁培育，7d后別離行Tuj1 、GFAP 、Galc 免疫細胞化學染色。

四、  條件培育液的制備

取1g雞胚的后肢骨骼肌安排，參與9mlD-Hanks液中冰浴勻漿15min，離心取得上清液，過濾除菌后，加兩倍體積DMEM/F12培育基制成條件培育液備用。

五、  神經干細胞的別離和傳代

無菌條件下取重生SD大鼠(出生48h內)腦安排，D-Hanks液充沛漂洗后，在解剖顯微鏡下剝離腦膜，精確別離海馬，用眼科剪將海馬剪碎后，再轉移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的無血清培育基，吸管吹打機械別離制作單細胞懸液，臺盼藍染色后細胞計數，調整細胞濃度為5×104~5個/ml，置于24孔培育板中培育，每孔參與細胞懸液500μl。